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2024年12月29日发(作者：git合并冲突怎么解决)
北京索莱宝科技有限公司
WesternblottingECL化学发光法检测试剂盒说明书
货号：
SW2010
SW2020
SW2030
SW2040
SW2050
Westernblotting(小鼠IgG)ECL化学发光法显色试剂盒
Westernblotting(兔IgG)ECL化学发光法显色试剂盒
Westernblotting(山羊IgG)ECL化学发光法显色试剂盒
Westernblotting(小鼠/兔IgG)ECL化学发光法显色试剂盒
Westernblotting(人IgG)ECL化学发光法显色试剂盒
产品内容：
1.封闭试剂：30g(可配制600ml)。
2.10倍浓缩抗体稀释液，50ml。
标记二抗，0.1ml，效价1：5000-10000。
显色液，25mlA+25mlB。
保存：
-20℃避光密闭保存，一年有效。若经常使用，可将封闭试剂，抗体稀释液和ECL显色液存放于2-8℃
以方便使用。
产品简介：
SDS-PAGE电泳后，蛋白质按照分子量大小分离，转移到固相载体（例如硝酸纤维素薄膜）后，固相载
体以非共价键形式吸附蛋白质，以固相载体上的蛋白质或多肽作为抗原，与对应的抗体起免疫反应，再与
酶标记的第二抗体起反应，加入发光底物后，能让胶片感光。经显影和定影后，可以在胶片上显示出条带
（抗原所在位置）。
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操作步骤：(仅供参考)
常规电泳转膜后:
1)清洗转印膜：将膜剥离下后，作好标记，一般在左上角剪一缺口。室温用TBS-T漂洗3次每次5min,以
尽量洗去转印膜上的SDS，防止影响后面的抗体结合。
2)按5g封闭试剂加100ml双蒸水计，配制膜封闭液，配好的膜封闭液为乳白色悬液，将漂洗过的转印膜
放入封闭液内，置摇床孵育，室温封闭30min。用TBS-T缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
3)将10×抗体稀释液用双蒸水稀释成1×（10ml10×抗体稀释液加入90ml双蒸水，混匀，可4℃保存三
个月）。此稀释液可作为一抗和二抗的稀释液。
4)用1×的抗体稀释液稀释一抗。根据用量以及一抗的推荐稀释浓度来稀释一抗。将杂交膜放入杂交袋中，
加入一抗工作液，封口，4℃孵育过夜或37℃摇动孵育2h。此用过的抗体一般可回收第二天再使用一次。
注：如果所加一抗不同，可在此步将膜沿电泳方向剪成条，分别作好标记，分开孵育。
5)用TBS-T缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次5min。
6)用1×的抗体稀释液稀释二抗。根据用量，按10ml抗体稀释液加入1-2ulHRP标记二抗的比例，配制
二抗工作液。将杂交膜放入杂交袋中，加入二抗工作液，封口，37℃摇动孵育1h。此用过的抗体一般可回
收第二天再使用一次。
7)用TBS-T缓冲液（PH7.6）洗膜，室温漂洗3次每次10min。
8)根据用量，取ECL发光液A、B等量混匀，加在膜正面，暗室显色1-5分种。倾去显色液，小心用纸吸
去显色液，在上面盖一层平整的透明纸。再取出感光胶片，做好标记，轻轻的放在膜上，显色30秒到1分
钟，取出胶片浸入显影液中，观察显色情况，再放入定影液中1分钟。根据条带强弱，再次感光时可减短
或者加长感光时间（从5秒到30分钟）以期达到理想结果。
注意事项：
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1.请根据一抗来源选择试剂盒。
2.可以根据显色结果来优化实验反应时间。如背景过深，可延长膜封闭时间，加长最终漂洗次数与时间。
如果条带过弱，可增加抗体浓度，可延长抗体孵育时间或加长感光时间。
-T（0.01M，PH7.6）配制方法：称取NaCl8.5g，Tris1.21g，用800ml的双蒸水溶解，用盐酸调
PH到7.6，再加入0.5mlTween－20，用双蒸水加至1000ml，混匀即可。（也可按照自己的配制习惯来配
制）
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