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2024年4月16日发(作者：iterator删除)

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雪旺细胞在留下的基底膜管里增殖而形成Ｂｕｎｇｎｅｒ带。近端轴突

再生通过Ｂｕｎｇｎｅｒ带，长向末梢器官并重新支配。雪旺细胞及基

底膜、纤维母细胞、胶原和吞噬细胞等构成了轴突的再生微环境。

再生微环境对于再生轴突起着接触引导、神经营养和神经趋化等

作用。其中雪旺细胞是最重要的，它不但能使再生轴突髓鞘化，

还能合成分泌神经营养因子来维持神经元存活，并且产生细胞外

基质成分与轴突相互作用，引导神经再生。目前已经证明与雪旺

细胞有关的神经营养因子（ＮＴＦｓ）有ＢＮＴＦ、ＣＮＴＦ、ＦＧＦ等。ＮＴＦｓ

在ＣＮＳ和ＰＮＳ的生长、发育和成熟中起重要作用，而且由于能

预防和减少因机械环境或基因损伤所致的神经退变，因此可作为

治疗神经损伤和疾病的工具。然而上述神经营养因子对运动神经

元作用不大，我研究室自１９９３年起，从雪旺细胞发现一种神经营

养蛋白，分子量为５４Ｋｄａ，不但对脊髓运动神经元有明显的神经

营养活性和促进轴突生长，且能对抗一氧化氮的神经细胞毒性，

还获得并保存了４株ＳＤＮＦ单克隆抗体分泌阳性细胞株，抗体类

别及亚型为ＩｇＧｌ。

关于ＳＤＮＦ的合成分泌及生物生理学机制不明了，体内分布

情况也不清楚。而且由于其合成分泌量甚微，一般的免疫组化技

术难以检测。免疫胶体金标记技术（ｉｍｍｕｎｏｃｏｌｌｏｉｄａｌ．ｇｏｌｄ

ｔｅｃｈｎｉａｕｅ

ＩＣＧＴ）是以胶体金为标记物，利用特异性抗原抗体反应，在光镜

电镜下对抗原物质定位、定性乃至定量研究的标记技术，具有较

高的敏感性和特异性，已成功应用于生物学和医学研究领域。胶

体金具有以下特征：１）可吸附酶、血凝素、蛋Ａ质抗原和抗体等

生物高分子配体并保持其活性。２）具有极高的电子密度。３）可

渗入超薄切片的细胞内部结构，加以标记。４）可作为银离子还原

成银原子反应的催化剂。５）易于制备和定量，稳定性好。

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因此，本实验用胶体金标记来分析研究ＳＤＮＦ的分布及亚细

胞定位及探询一种对ＳＤＮＦ进行分布和定位研究的方法，为以后

研究ＳＤＮＦ的变化、代谢情况以及结合部位和受体分布打Ｆ基础。

这些都为我们更好地认识周围神经损伤的机制，提高修复质量有

十分积极的意义。

本研究由四部分组成

第一部分：雪旺细胞分离、纯化、培养及鉴定

选用体重２００—２５０克／只的ＳＤ大鼠五只，于骨盆入口处切断

双侧坐骨神经，两周后取出双侧坐骨神经，去除外膜、剪碎，用

０．２５％胰蛋白酶和１０００Ｕ／ｍｌ胶原酶消化，离心后加细胞培养夜配

成细胞悬液，双差速粘附法除去成纤维细胞，将纯化后的雪旺细

胞：悬液滴于置于培养皿内的盖玻片上，于５％Ｃ０，，３７０Ｃ条件下培

养９６小时，用丙酮固定后先行抗Ｓ一１００免疫组化鉴定雪旺细胞。

结果发现收集到的雪旺细胞对Ｓ－１００抗体呈强阳性反应，纯度达

９５％。

第二部分：免疫金银法对雪旺细胞源运动神经营养因子进行标记的

可行性研究

取已固定的雪旺细胞片，用雪旺细胞源运动神经营养因子单

克隆抗体作为…抗，胶体金结合的羊抗小鼠ＩｇＧ抗体作为二抗与

其结合，再用银染液对其显色。雪旺细胞胞浆被染为黑色，呈强

阳性反应。

第三部分：雪旺细胞源运动神经营养因子的亚细胞定位

四只ＳＤ大鼠，梨状肌下缘切断‘侧坐骨神经。两周后取远

段变性坐骨神经。经２．５％戊二醛固定，丙酮逐级脱水，环氧树脂

渗透后包埋，在烘箱中聚合。包埋组织块用超薄切片机切成７０．

８０ｎｍ切片，并捞于铜网上。将其在３％的Ｈ，０，中蚀刻１５ｍｉｎ，ＳＤＮＦ


本文标签： 神经 营养 抗体 研究 因子

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