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2024年12月29日发(作者：函数的概念与性质笔记)
极敏型 EＣL化学发光底物试剂盒
试剂盒组成:
货号
ＥCＬ—F-
１０0
EＣＬ-Ｆ－
500
组份
A 液
B 液
说明书
Ａ 液
Ｂ 液
说明书
数量
50mL
50ｍL
１ 份
２50ｍL
2５0mＬ
１ 份
储存：建议置于４ ºＣ避光保存，一年稳定。
一、产品简介：
本试剂盒是非放射性发光系统，用于检测固定在膜上的蛋白或核酸,灵敏度高，背景
低，最低检测灵敏度可达低飞克（ｆemtoｇｒam）级乃至飞克级以下,适用于检测极痕量
蛋白或核酸。发光信号持续时间较长,半小时以后仍可维持7５%的发光，便于反复曝光操
作。与其他 ECL 化学发光底物相比,可显著减少样本及一抗和二抗的使用量.
二、原理:
极敏型ＥCＬ化学发光底物试剂盒用于检测直接或间接标记辣根过氧化物酶(HRP）的
抗体、抗原或者核酸.蛋白质或核酸在电泳后转移到印迹膜上，以HＲＰ标记的抗体或探
针结合膜上的目的蛋白或核酸，洗膜后置于用本产品配制的ECＬ工作液中，室温孵育数
分钟，HＲＰ使工作液中的鲁米诺(Lｕｍinol）氧化并发光，试剂中添加的增强配方可以
使这种发光得到极大增强,从而能够检测更低表达量的蛋白质或核酸。此光经X光胶片或
者电子装置感光记录下来,可清晰显示蛋白质或核酸条带。
三、产品优点：
低飞克级灵敏度-—极高的灵敏度，能快速检测更广泛的蛋白范围,最低可检测飞克
( ｆemtｏgｒam )级以下的蛋白.
信号稳定-—发光时间较长，能进行多次曝光，半小时以后仍可维持７5％的发光。
信号强-—发光信号比对碘苯酚增强的 HRP－鲁米诺检测体系得到极大增强.
稳定性较高-—试剂盒可在4度稳定存放一年.
节约抗体—-需要更少（稀释更多)的一抗和二抗,特别节省抗体(推荐用量：一抗
０．01－0．2μg/mＬ，二抗2—1０ｎg/mL）.
四、使用方法：
1。 印迹膜制备：执行常规电泳、转膜、HＲP标记的抗体或者ＨＲP标记的核酸探针
孵育、洗膜；ＥＣＬ工作液含有HＲP催化的发光底物，检测系统必须基于HＲP酶标记
的抗体或者核酸探针.充分的洗涤对于降低背景非常重要，所有步骤均在室温下完成.
2． ECＬ工作液的配置：在使用前取等量A液和B液，充分混匀后尽快使用;将膜片
置混合液中,于室温下孵育约2分钟,每平方厘米膜片至少使用0。1－０．2ｍｌ以覆盖全
膜片，注意不要在膜片表面形成气泡。
3。蛋白或核酸信号显现:
1）． 用平头镊钳住膜片，垂直置于吸水纸上以吸去过量试剂，仅留下少量液体覆盖
表面，不可让膜完全干燥;
2）． 将膜片置于保鲜膜上，吸附蛋白面朝上，小心赶尽气泡;
３）. 用电子装置感光，或在暗室中用X光片曝光;
4）. 根据信号强弱适当调整曝光时间，也可选择不同时间多次曝光，以取得最佳效
果。
五、安全性：
无特殊毒性,按普通化学品处理.如果不慎与眼、皮肤和衣物接触，请立刻用大量清水
冲洗。
六、注意事项：
1.由于不同品牌的抗体质量不同，以及抗体的保存条件和保存时间的不同，初次使用
时建议对抗体用量进行优化，以取得最优效果。
2．勿将ＥCＬ化学发光底物试剂盒暴露在阳光或强光下,否则易导致其失活；建议保
存在棕色瓶中,并避免长时间暴露在阳光下，实验室光照对试剂盒影响不大；除了Ｘ光胶
片曝光和洗片处理外,所有步骤均不必在暗室中操作。
3。使用充足的洗涤缓冲液、封闭液、抗体稀释液和底物工作液去覆盖印迹膜，以确保
印迹膜处于湿润状态；使用大量的封闭液和洗涤液能减少非特异性信号的产生.
4．使用前配制EＣL工作液，体积足够覆盖膜片即可；取Ａ液和B液时一定要用不同
的枪头,互相污染可能导致缓慢失活；配制完毕建议立即使用工作液,室温放置数小时后
仍可使用但灵敏度略有降低；弃去使用过的混合试剂.
5.印迹膜与ECL工作液孵育后约3 min时发出的荧光最强,随后荧光会随着时间的延
长而缓慢减弱，至3０miｎ仍可保持约75％的光信号；蛋白点荧光较弱时可以适当延长
曝光时间;使用过少的ＥCＬ工作液不利反应进行，为达节约目的可将膜剪小，但勿降低E
ＣL工作液使用比例。
6．使用生物素/亲和素体系时，避免使用脱脂奶粉作为封闭液，因为脱脂奶粉中含有
多种内源性生物素，容易产生非特异性信号。
7． 避免将多张膜置于同一个洗膜盒内洗膜，相互吸附或摩擦可能造成很深的背景.
８。 金属氧化物颗粒可能会造成膜上出现颗粒状斑点,避免使用带有锈迹的剪刀以及
镊子，建议使用塑料的平头镊子.
9.叠氮化钠(NaN3）能抑制HRP活性，应避免使用NaN3,如必须使用，浓度不要超过
0.01％。
1０. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作;戴手套可以避免在膜上
留下手印，保持膜的干净。
11．本产品仅供研究使用。
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