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2024年12月28日发(作者：sdk安装包)
・３００・ 山西医药杂志２００９年４月第３８卷第４期下半月 Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｐｒｉｌ ２００９，Ｖｏ１．３８，Ｎｏ．４ ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ
基质金属蛋白酶一２和９在混合性结缔组织病
单个核细胞中的表达
晋中市第二人民医院（０３０８００）
化红霞王香弟 李锦艳
【摘要】 目的探讨基质金属蛋白酶（ＭＭＰ）一２和９与混合性结缔组织病（ＭＣＴＤ）的关系。方法 采用
Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹方法，检测ＭＣＴＤ患者外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）中ＭＭＰ一２和ＭＭＰ－９的蛋白表达水平。结果
ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９在ＭＣＴＤ患者外周血ＰＢＭＣ中的蛋白表达水平明显高于健康对照组。结论 ＭＭＰ－２和
ＭＭＰ－９可能在ＭＣＴＤ的发生中起作用。
【关键词】基质金属蛋白酶类； 混合性结缔组织病
混合性结缔组织病（ｍｉｘｅｄ ｃｏｎｎｅｃｔｉｖｅ ｔｉｓｓｕｅ
ｄｉｓｅａｓｅ，ＭＣＴＤ）是一种为临床上具有系统性红斑
狼疮（ＳＬＥ）、系统性硬皮病和多发性肌炎特征的，
采用Ｆｉｃｏｌｌ—Ｈｙｐａｑｕｅ密度梯度离心法分离，离心后管内分
为三层，上层为血浆和Ｈａｎｋ液，下层主要为红细胞和粒细
胞，中层为淋巴细胞分离液，在上、中层界面处有一以单个
核细胞为主的白色云雾层狭窄带，单个核细胞包括淋巴细
胞和单核细胞。分离获得单个核细胞。３ ｍＬ血分离血清
后保存于一７Ｏ℃，用于血清蛋白提取及Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检
测。
血清中有高滴度ＲＮＰ抗体，对皮质类固醇反应良
好的一组疾病，目前认为是一种独立的疾病。本病
女性发病较多，女性与男性之比为４：ｌ，３Ｏ岁左右
多见，儿童和老年都可发病。临床表现有多发性关
１．３．２血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ一９检测：按照文献［４］所述方法
稍加修改后检测血清ＭＭＰ－２、ＭＭＰ一９。血清１５ ０００ ｒ／ｍｉｎ
离心１０ ｍｉｎ后，取１ ｍＬ血清加入１００ Ｌ肝素琼脂糖凝
胶，缓慢旋转振摇２ ｈ；３ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心５ ｍｉｎ，去除上清，
磷酸盐缓冲液（ＰＢＳ）清洗沉淀１次，离心沉淀中加入４Ｏ肛Ｌ
２×聚丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤＳ）加样缓冲液，１００℃煮沸５
ｍｉｎ，离心，取上层液体点样。经１Ｏ 十二烷基磺酸钠一聚
丙烯酰胺凝胶电泳（ＳＤ ＰＡＧＥ）电泳分离、转膜、封闭后，
依次ＪＪ Ｉｌ八鼠抗ＭＭＰ一２、ＭＭＰ一９多克隆抗体４℃过夜，二抗
（抗鼠ＩｇＧ）室温孵育１～２ ｈ，用Ｐｉｅｒｃｅ公司的ＥＣＬ试剂盒
进行化学发光检测。ｘ线片压片、显影、定影。
１．４统计学方法
数据采用ＳＰＳＳ１３．０统计软件处理，ＭＣＴＤ患者年龄
节痛和关节炎、手肿胀、雷诺现象、肌无力、肌痛、间
质性肺炎和肺纤维化等。基质金属蛋白酶（ｍａｔｒｉｘ
ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅｓ，ＭＭＰ）在细胞外基质的蛋白分
解中具有重要作用［１＿３］。本研究采用Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹
方法对ＭＣＴＤ患者的外周血单个核细胞（ＰＢＭＣ）
中ＭＭＰ一２和ＭＭＰ一９的蛋白表达水平进行检测，
探讨ＭＭＰ在ＭＣＴＤ发生、发展中的可能机制。
１ 对象与方法
１．１对象
ＭＣＴＤ患者选自我院皮肤科和风湿科２００６年１月至
２００８年９月门诊及住院患者，诊断依据Ｓｈａｒｐ（１９８３）的标
准，以临床表现、抗ＲＮＰ抗体滴度升高及抗核抗体、抗Ｓｍ
抗体阳性，补体沉积改变综合判断疾病的活动性。检测前，
患者至少３个月内未接受糖皮质激素、免疫抑制剂或具有
分布与健康对照组年龄分布比较采用Ｋｒｕｓｋａｌ—Ｗａｌｌｉｓ Ｈ
检验（方差不齐，非正态分布）。两组间性别分布分析采用
Ｆｉｓｈｅｒ精确检验（ｎ＜４０，Ｔ＜５）；检验水准 一０．０５。
免疫调节作用的药物治疗。健康对照组来自健康志愿者。
１．２仪器和试剂
２ 结 果
鼠抗ＭＭＰ－２抗体、鼠抗ＭＭＰ－９抗体以及鼠抗 肌动
蛋白抗体均购自美国Ｓａｎｔａ Ｃｒｕｚｅ公司，抗鼠ｌｇＧ（抗）购自
２．１临床资料：ＭＣＴＤ患者２Ｏ例，其中男性６例，女性１４
例，男：女为１：２．３３；年龄１６￣６５岁，中位年龄３８．２５岁；
病程１个月至１Ｏ年，平均（２９士２８）个月。健康对照组１Ｏ
例，男性３例，女性７例，年龄１５～６６岁，中位年龄３８．７８
岁。两组之间在年龄、性别构成比方面差异无统计学意义
（Ｐ＞０．０５）。
美国ＳａｎｔａＣｒｕｚｅ公司，淋巴细胞分离液Ｆｉｏｌｌ（上海试剂二
厂），蛋白相对分子质量标准（中国科学院上海生物化学研究
所），硝酸纤维素膜和偏二氟乙烯（ＰＶＤＦ）膜（美国Ｐｉｅｒｃｅ公
司），尼龙膜（美国Ｐａｌｌ ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎ，Ｌｉｆｅ ｓｃｉｅｎｃｅ公司）。
１．３方法
２．２ ＭＭＰ一２、ＭＭＰ－９在ＭＣＴＤ患者ＰＢＭＣ中的蛋白表
１．３．１标本采集：征得患者及健康志愿者同意后均于上午
８：ＯＯ～９：００抽取空腹静脉血８ ｍＬ，其中５ ｍＬ肝素抗凝，
达：我们随机选取４名健康对照以及４例ＭＣＴＤ患者进行
Ｗｅｓｔｅｒｎ印迹检测分析，结果发现：ＭＭＰ－２在４例ＭＣＴＤ
山西医药杂志２００９年４月第３８卷第４期下半月 Ｓｈａｎｘｉ Ｍｅｄ Ｊ，Ａｐｒｉｌ ２００９，Ｖｏ１．３８，Ｎｏ．４ ｔｈｅ Ｓｅｃｏｎｄ
・ ３Ｏ１ ・
患者外周血ＰＢＭＣ中表达明显上调，其表达水平明显高于
ＭＣＴＤ的发生发展中起着作用。
健康对照组。同样，ＭＭＰ－９在４例ＭＣＴＤ患者外周血
参考文献
ＰＢＭＣ中表达水平也明显高于健康对照组。
１杨荫昌．单纯性多发性肌炎２３例临床观察．中华神经精神科杂
３讨 论
志，１９８３，１６（６）：３４０．
ＭＭＰ是一类锌依赖性内肽酶，目前已发现２Ｏ
２ Ｋｏｈ ＥＴ，Ｏｎｇ Ｂ．Ａｄｕｌｔ ｐｄｙｎｒｙｏｓｉｔｉｓ；ｃｌｉｎｉｃａｌ ａｎｄ ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ ｌｅａ—
ｔｕｒｅｓ ａｎｄ ｔｒｅａｔｍｅｎｔ ｒｅｓｐｏｎｓｅ ｉｎ ７５ ｐａｔｉｅｎｔｓ．Ａｎｎ Ｒｈｅｕｍ Ｄｉｓ，
余个成员，是降解细胞外基质最重要的酶系。
１９９３，５２：８５７－８６１．
ＭＭＰ家族中的明胶酶，包括Ａ（ＭＭＰ一２）和Ｂ
３ Ｒａｍ Ｍ，Ｓｈｅｒｅｒ Ｙ。Ｓｈｏｅｎｆｅｌｄ Ｙ．Ｍａｔｒｉｘ ｍｅｔａｌｌｏｐｒｏｔｅｉｎａｓｅ－９ ａｎｄ
（ＭＭＰ一９）两类，其作用底物包括明胶、Ⅳ、Ｖ、Ⅶ、
ａｕｔｏｉｍｍｕｎｅ ｄｉｓｅａｓｅｓ．Ｊ Ｃｌｉｎ Ｉｍｍｕｎｏｌ，２００６，２６（４）：２９９—３０７．
Ｘ型胶原和弹性纤维，它们是降解Ⅳ型胶原最主要
４ Ｒｏｕｈｉａｉｎｅｎ Ａ，Ｉｍａｉ Ｓ，Ｒａｕｖａｌａ Ｈ，ｅｔ ａ１．Ｏｃｃｕｒｒｅｎｃｅ ｏｆ ａｍｐｈｏ—
的酶。Ａ类为ＭＭＰ－２，相对分子质量为７ ２００，来
ｔｅｒｉｎ（ＨＭＧＢ１）ａｓ ａｎ ｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓ ｐｒｏｔｅｉｎ ｏｆ ｈｕｍａｎ ｐｌａｔｅｌｅｔｓ ｔｈａｔ
源于间质细胞、肿瘤细胞等，分解底物［１ ］。ＭＭＰ
ｉｓ ｅｘｐｏｒｔｅｄ ｔｏ ｔｈｅ ｃｅｌｌ ｓｕｒｆａｃｅ ｕｐｏｎ ｐｌａｔｅｌｅｔ ａｃｔｉｖａｔｉｏｎ．Ｔｈｒｏｍｂ
Ｈａｅｍｏｓｔ，２０００，８４：１０８７—１０９４．
是胚胎发育、组织再生等正常生理过程中不可缺少
（收稿日期：２００８—１１—１９）
的物质。，
作者简介：化红霞，女，１９６７年６月生，主治医师，晋中市第
本研究结果显示：ＭＭＰ－２、ＭＭＰ－９在ＭＣＴＤ
二人民医院，０３０８００
患者外周血ＰＢＭＣ中的蛋白表达水平明显高于健
康对照组。这一结果提示ＭＭＰ一２、ＭＭＰ－９在
・
病例报告・
左氧氟沙星致过敏性休克一例
河北省滦南县医院（０６３５００） 李敬东
患者女，１７岁，因咳嗽、发热７ ｄ人院，既往体健，否认
肌肉注射，７０６代血浆静脉滴注，地塞米松注射液１０ ｍｇ入
药物过敏史。查体：体温３８．５℃、脉搏９６次／ｍｉｎ、呼吸２１
壶，症状逐渐缓解。
次／ｍｉｎ、血压１５／９ ｋＰａ，神志清楚，频繁咳嗽、无痰，唇无紫 讨论左氧氟沙星为第三代喹诺酮类药物，属于广谱
绀，胸廓对称无畸形，右肺尖部扣浊音，呼吸音略低。胸片
杀菌药，为氧氟沙星的左旋体，其抗菌活性约为氧氟沙星的
报告：右肺上叶炎症。遂以肺炎收人院，按医嘱给予左氧氟
２倍，它的主要作用机制是通过抑制细菌ＤＮＡ旋转酶（细
沙星氯化钠注射液（商品名：舍奇，辽宁海神联盛制药有限 菌拓扑异构酶）的活性，阻碍细菌ＤＮＡ的复制而达到抗菌
公司，批号：２００７０６１４１，规格：１００ ｍＬ：乳酸左氧氟沙星０．２
作用，临床应用广泛。常见的不良反应有恶心、呕吐、腹痛、
ｇ与氯化钠０．９ ｇ），约２ ｍｉｎ后，患者突然出现胸闷、气短、
腹泻等胃肠道症状，头晕、头痛等神经系统症状。出现过敏
口唇紫绀、大汗、周身皮疹，立即停止左氧氟沙星静脉滴点，
性休克并不多见，应引起临床重视。对有左氧氟沙星过敏
更换液路，静脉滴注５ 葡萄糖氯化钠注射液，苯海拉明２Ｏ 史患者，应避免使用以免引起严重的后果。
ｍｇ肌肉注射，吸氧，地塞米松５ ｍｇ入壶，之后，全身皮疹渐
（收稿日期：２００８－１１－１２）
消退，胸闷、气短缓解，１０ ｍｉｎ后，患者出现周身发冷、寒 作者简介：李敬东，男，１９７２年３月生，主管药师，河北省滦
战，伴上腹部疼痛。查体：体温３８．５℃，血压测不到，颜面
南县医院，０６３５００
青紫，脉搏１１０次／ｍｉｎ，给予山莨菪碱１０ ｍｇ、安痛定３ ｍＩ
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