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2024年12月27日发(作者：htmltextarea怎么选中其中一行)
1。称取TMB
17.2
mg（固体），加
DMS01
ml溶解，然后加醋酸钠缓冲液
（/1, pH5.5）66
ml，此为底物A
底物B ,取双蒸水100ml口
3 0%
H2O2
17
微升
使用时 A： B 液等体积混匀即可.
称取 TMB 20mg（ 固体），先用无水乙醇 10ml 溶解，充分振荡（试剂瓶要干净，干燥），加双蒸水定容到
100 ml ，此为底物 A
底物B ,取1水柠檬酸 2.1g,无水Na2HPO4 2.82g，0.75%的过氧化氢尿素 0.64ml，双蒸水定容至100ml（无 须调 PH 值，应
在 4.5-5.0 范围。
使用时 A： B 各取 5ml 混匀，可用于一块 96 孔板显色。
过氧化氢脲比 H2O2 稳定，不必如 H2O2 现用现配，都起供氢体的作用。
2
TMB（10mg/5ml 无水 l 乙醇） 0.5ml
底物缓冲液 10ml
0.75% 过氧化氢 32ul
底物缓冲液 :
0.2M 磷酸氢二钠 25.7ml
0.1M 柠檬酸 24.3ml
加蒸馏水 50ml
TMB 使用液：
TMB （10mg/5ml ，无水乙醇） 0.5ml
底物缓冲液 10ml
0.75% H2O2 32 Ul
3.
TMB加入2.5ml无水酒精中，可加热至37
°C
〜40
C
直到TMB完全溶解。
将TMB配成1%浓度，4
C
保存半年以内使用。
使用前，用pH5.0磷酸一柠檬酸底物液9.9ml加入0.1ml （1mgTMB ） 1%TMB液，再按每毫升 TMB加入 30% H2O21ul 混
匀后立即使用。
2NH2SO4 终止后， 450nm 测定 OD 值。
4.
HRP 的底物：
A液：0.02%H202 ;用0.1M柠檬酸-0.2M磷酸氢二钠，PH4.5〜5.0稀释。
B液：TMB-HCl : 0.4
%o；
用50mM柠檬酸钠，浓 HCI调PH值为2.8的溶液溶解。
A 液， B 液各 50ul 使用。可使用起来显色比较缓慢， OD 值较 PIERCE 的底物稍偏低一点。
5.
1、 TMB粉末，溶于N
，
N —二甲基甲酰胺，配成 10mg/mL。
2、 底物缓冲液： 0.2Mol/LNa2HPO4 25.7mL
0.1Mol/L 柠檬酸 24.3mL
水 50mL
3、 H2O2
用时 10mg/mL TMB 165uL
底物缓冲液 11mL
H2O2 3.3uL
酶标板中 每孔加 100Ul 。
6.
1.
2.
底物液 A：TMB200mg ，无水乙醇（或 DMSO ） 100ml, 加双蒸水至 1000ml 。
底物 B 缓冲液（ 0.1ml/L 柠檬酸 -0.2ml/L 磷酸氢二纳， pH5.0-5.4 ） :
Na2HPO4 14.60g ，柠檬酸 9.33g ， 0.75% 过氧化氢尿素 6.4ml ，加三蒸水至
1000ml ，调至 pH5.0-5.4
3. 将底物液 A 和底物 B 按 1：1 混合即成 TMB- 过氧化氢尿素应用液。 这种方法简单、方便、节约试剂，同时过氧化氢尿
素较过氧化氢稳定，更 能够确保准确性，荐议大家与我共同分享。哦，但是还有一点要注意，一 次不要配太多， A 液久置易变
色。
7.
Substrate 'Stock' Solution
• 58mg Tetramethylbenzidine （TM
• 5ml DMSO
• Dissolve TMB in DMSO - wear gloves, and use fume cupboard.
• Cover container in tin foil, label as 'toxic'.
• Store at room temperature in toxic cupboard for up to 1 month.
Substrate 'Working' Solution
• 100ml of TMB stock solution per 10ml of substrate buffer.
• 10ml of H2O2 per 10ml of substrate buffer.
8.
1, 称取3,3 ' ,5,5四'甲基联苯胺（TMB ） 0.08g，力口 40ml二甲亚砜溶解，加 60ml甲醇，混匀，力口 100ml底 物缓冲液在
暗处搅拌 2 小时至溶解，室温静置 4 小时。
2, 取50卩L TMB（10 mg TMB溶于1mL二甲基甲酰胺中）溶液+10 mL底物缓冲 液+10卩L30%过氧化氢，混 均。
9.
底物液
底物：仃MB-H2O2 溶液）pH 5.5
底物缓冲液（PH5.0，0.1M 柠檬酸-0.2M Na
2
HPO
4 1
2H2O）:
1.84g Na
2
HPO
4
.12H2O 和 0.47g 柠檬酸，加水到 100ml，调节 pH 值 5.0-5.4
或 9.2g Na
2
HPO
4
.12H2O 和 2.35g 柠檬酸，加水到 500ml ，调节 pH 值 5.0-5.4
50ml 0.75% H
2
O
2
:取 30% H
2
O
2
1.25ml, 总体积调整为 50ml.
TMB（四甲基联苯胺）使用液：取200mg TMB溶解于100ml无水乙醇中。-20 °C保存
临用时配：
TMB（2mg ／ml 无水乙醇 ） 0.5ml
底物缓冲液 （PH5.5）
0.75
％
H
2
O
2
42ul
10.
底物显色液 A 液： 醋酸钠 13.6g 柠檬酸 1.6g
H2O2 （ 30% ） 0.3ml
9.5ml
dH2O 500ml 底物显色液 B 液（避光保存）
EDTA-Na 0.2g
柠檬酸 0.95g
甘油 50ml
TMB（ 四甲基联苯胺 ） （用 DMSO 溶解为 10mg/ml 后在加） 0.2g dH20 500ml加入A、B液各50微升，37
C
显色。
底物显色液
A
液：
醋酸钠
13.6g
柠檬酸
1.6g
H2O2
（
30%
）
0.3ml
dH2O
至
500ml
底物显色液
B
液（避光保存）
EDTA-Na 0.2g
柠檬酸
0.95g
甘油
50ml
TMB（
四甲基联苯胺
）
（用
DMSO
溶解为
10mg/ml
后在加）
dH2O
至
0.2g
500ml
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