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2024年12月27日发(作者：fetch什么意思中文翻译成为)
BirA酶工作液配制实例翻译
比拉酶促进生物素标记BSP位点的说明书实例，及计算方式，英文版翻译，有中文语法错误的轻
参考原文。
Example calculation for determining the amount of BirA needed for your reaction:
For this example we will assume we are using a peptide substrate with AviTag™ of 15 kDa MW (note: the AviTag™ is
1.829 kDa MW).
1 nmol of a 15 kDa protein = 15µg; therefore 10 nmol = 150µg (2.5µg of BirA is recommended per 10nmol).
For a 1mg/mL solution of the substrate, 0.5mL would contain 500µg of that substrate.
- 500µg substrate/(150µg substrate/10 nmol) = 33.3 nmol of substrate to be biotinylated
- 33.3 nmol of substrate/(10 nmol of substrate/2.5µg BirA) = 8.325µg BirA
For best efficiency the substrate needs to be at 40µM concentration. In our example we have currently
0.5mL at 1mg/mL.
- 1mg/mL = 1000µg/mL = 66.6 nmol/mL = 66.6 µmol/L = 66.6µM.
We need to dilute the reaction solution to 40µM final.
- (66.6µM/40µM)(X/0.5mL); X = 0.83mL
So the final reaction mix would need to be brought up to 0.83mL with BiomixA (10X), BiomixB (10X),BirA and water
(or your buffer of choice, see precautions below).
- 500µL of 66.6µM substrate + 83µL BiomixA + 83µL BiomixB + (164µL – XµL of BirA for 8.325µg*)water + XµL BirA
= 0.83mL final reaction volume at 40 µM substrate concentration. (*BirA is offered at 1mg/ml or 3mg/mL
concentrations).
用于确定反应所需的 BirA量的示例计算：
对于此示例，我们将假设我们使用的肽基板与 AviTag™分子量为15 kDa（注意：AviTag™™为1.829 kDa MW）。
15 kDa蛋白质的 1 nmol = 15μg; 因此10 nmol = 150μg（推荐每10 nmol使用2.5μg的Bira酶）。
对于肽基板的1mg/mL溶液，0.5mL将包含该基板的500μg。
- 500μg基板/（150μg 基板/10 nmol）= 33.3 nmol 基板进行生物素化
500
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