多数据库联合探究TEKT2在卵巢癌中的作用

第

27

卷第

2

期

圆园23

年

4

月

生命科学研究

蕴蚤枣藻杂糟蚤藻灶糟藻砸藻泽藻葬则糟澡

灾燥造援27晕燥援2

Apr.圆园23

DOI:10.16605/.1007-7847.2021.06.0171

生物信息学

窑窑

多数据库联合探究

TEKT2

在卵巢癌中的作用

(青海大学附属医院,中国青海西宁810012)

摘要

:

为了探讨筑丝蛋白2(tektin2,TEKT2)在卵巢癌(ovariancancer,OV)中的表达情况、临床意义及功能机

制,为OV的早期诊断和治疗提供新思路,本研究通过多个数据库的联合运用探讨TEKT2在OV中的作用。首

先,应用GEPIA2数据库分析TEKT2在OV中的表达情况,同时使用GEPIA2数据库

、

TIMER数据库和Ka-

plan-Meier绘图平台探究TEKT2在OV中的预后价值;其次,采用Pearson分析探究TEKT2与肿瘤蛋白53

(tumorprotein53,TP53)在OV中的相关性,并且基于Kaplan-Meier绘图平台探究TEKT2预后价值与TP53突

变类型的关系;再次,通过TIMER数据库分析TEKT2与免疫细胞的相关性;最后,实时聚合酶链反应(re-

al-timePCR)被用来验证

TEKT

2在OV细胞中的表达,细胞增殖毒性检测(CCK-8)被用来评估TEKT2与OV

细胞增殖的关系。结果显示:

TEKT

2在OV中高表达,与OV患者的预后较好相关,且是一个独立预后因素;在

OV患者中,TEKT2与TP53的表达呈正相关,并且在野生型TP53患者中,TEKT2具有预后价值;TEKT2的高

表达与巨噬细胞和中性粒细胞密切相关,其中TEKT2的臂水平缺失与中性粒细胞的浸润显著相关。进一步的

CCK-8实验结果表明,TEKT2可抑制OV细胞的增殖。上述研究提示,TEKT2可能通过调节免疫细胞的浸润

和抑制OV细胞的增殖影响OV患者预后

。

关键词

:

筑丝蛋白-2(TEKT2);卵巢癌(OV);预后分析;免疫细胞浸润;细胞增殖;生物信息学

中图分类号

:

Q811.4,R737文献标志码

:

A文章编号

:

1007-7847(2023)02-0170-09

袁美莉

,

李妍

,

赵亮

*

ExplorationoftheRoleofTEKT2inOvarianCancerby

CombinationofMultipledatabases

Abstract:Toinvestigatetheexpression,clinicalsignificanceandfunctionalmechanismoftektin2(TEKT2)

inovariancancer(OV),andprovidenewideasinearlydiagnosisandtreatmentofOV,multipledatabaseswere

y,theexpressionofTEKT2intheOVtissuewas

gnosticvalueofTEKT2inpatientswithOVwasexploredby

ly,thecorrelationbetweenTEKT2andtu原

morprotein53(TP53)inOVwasexploredbyPearsoncorrelationanalysis,andtherelationbetweenTEKT2

prognoy,thecorrelation

y,theexpressionofTEKT2in

OVcellswasverifiedbyrealtime-PCR,andtheeffectofTEKT2ontheproliferationofOVcellswasevalua-

tedusingCellCountingKit-8(CCK-8).TheresultsshowedthatTEKT2washighlyexpressedinOVtissue,

whichwasrelatedtoagoodprognosisofOVpatients,

OVpatients,TEKT2waspositivelycorrelatedwiththeexpressionofTP53,andinwild-typeTP53patients,

pressionofTEKT2wascloselyrelatedtomacrophagesandneutrophils,

inwhichobviouscorrelation

importantly,lusion,this

studyfoundthatTEKT2mayaffecttheprognosisofOVpatientsbyregulatingimmunecellinfiltrationand

收稿日期

:2021-06-10;

修回日期

:2021-08-22;

网络首发日期

:2023-03-29

作者简介

:袁美莉(1989—),女,青海西宁人,硕士研究生;

*

通信作者:赵亮(1987—),女,青海西宁人,主治医师,主要从事妇科肿瘤基

础研究,E-mail:****************。

(QinghaiUniversityAffiliatedHospital,Xining810012,Qinghai,China)

YUANMeili,LIYan,ZHAOLiang

*

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第

2

期

袁美莉等：多数据库联合探究

TEKT2

在卵巢癌中的作用

171

inhibitingOVcellproliferation.

Keywords:tektin2(TEKT2);ovariancancer(OV);prognosticanalysis;immunecellinfiltration;cellproli-

feration;bioinformatics

（LifeScienceResearch，2023，27（2）：170-178）

卵巢癌

(ovariancancer,OV)

是女性生殖系统

肿瘤中恶性程度较高的肿瘤之一

[1]

,

致死率约为

47.4%,

主要原因是早期诊断率较低

,

据统计

,

大

约

70%

的

OV

被确诊时已经处于晚期

[2]

。手术切

除、细胞减灭术和铂

-

紫杉烷联合化疗是

OV

治疗

随着

OV

治疗方法的不断改善

,

在最常用的方法

[3]

。

过去的

30

年

,OV

患者的生存率提高了约

20%

[4]

。

研究显示

,

血管内皮生长因子

(vascularendothelial

聚腺苷二磷酸核糖聚合酶

growthfactor,VEGF)

、

(polyADP-ribosepolymerase,PARP)

和

PI3K/Akt/

mTOR

信号通路等可促进

OV

细胞增殖和转移

[5-7]

。

目前

,

针对这些关键分子和通路的靶向治疗药物

已经应用于临床

,

然而

OV

的发生和发展是多种

分子相互调控导致的

,

其具体分子机制尚未被完

全阐明。因此

,

发现新的生物标志物对于

OV

的机

制探究和治疗仍至关重要

。筑丝蛋白

2(tektin2,

TEKT2)

属于筑丝蛋白家族成员

,

是一种纤维形成

蛋白质

,

最早被发现可与微管蛋白形成鞭毛

,

可

能与精子发生过程相关

[8]

。相关研究表明

,TEKT2

不仅参与精子运动

,

而且与癫痫和内耳发育异常

关系密切

[9-10]

。目前

,

关于

TEKT2

在肿瘤中的作用

很少有研究报道

。

本研究从多个角度探究了

TEKT2

在

OV

中

的作用

,

包括

:

应用多种数据库分析

TEKT2

的表

达情况、预后价值、治疗靶点相关性和免疫相关性

;

应用实时聚合酶链反应

(real-timePCR)

验证

TEKT2

在

OV

细胞中的表达

;

采用细胞增殖毒性检测

(CCK-8)

实验分析

TEKT2

对

OV

细胞增殖的调节

作用。本研究首次证明了

TEKT2

在

OV

中的作用

,

为

OV

分子机制的探究和治疗提供了理论依据。

基因的差异表达分析

。在该研究中

,

我们基于

lim-

ma

分析

,

应用

GEPIA2

平台对

TEKT2

在多种肿

瘤组织和相应正常组织之间的表达情况进行分

析

,P<0.05

为表达具有显著差异。

1.1.2TEKT2的预后分析

Kaplan-Meier

绘图平台

[12]

(/

analysis/,2021-04-20)

能够评估

5

万多个基因在

21

种癌症类型的预后价值

。本文基于

Kaplan-

Meier

绘图平台自带的

Kaplan-Meier

生存分析工

具探究

TEKT2

在

OV

中的预后价值。

TIMER

数据

库

[13]

主要是一个基于

RNA-seq

数据评估免疫细

胞浸润的工具

,

其也可对基因进行差异表达分析

和预后分析。在

该研究中

,

我们应用

TIMER

和

GEPIA2

进一步验证

TEKT2

的预后价值

,

并应用

TIMER

对

TEKT2

在包括

OV

在内的多种肿瘤中

的预后价值进行分析

。

1.1.3TEKT2预后价值的Cox回归分析

影响肿瘤患者预后的因素并不是单一的

,

因

此在探究肿瘤预后影响因素的过程中

,

确定一个

因素是否为独立预后因素至关重要。为了确定

TEKT2

是否为

OV

的独立预后因素

,

我们对年龄

、

种族、肿瘤纯度、

B

细胞、

CD8

+

T

细胞、

CD4

+

T

细胞、

中性粒细胞、树突状细胞和

TEKT2

进行了单因素、

多因素

Cox

回归分析。具体操作

:

在

TIMER

在线

工具中纳入可能影响

OV

预后的因素

,

然后基于

TCGA

数据库中的基因测序数据和临床数据进行

Cox

回归分析。

1.1.4

析

TEKT2与TP53在OV中表达的相关性分

1材料与方法

1.1数据库分析

1.1.1TEKT2在肿瘤组织和癌旁组织中的差异

表达分析

GEPIA2

[11]

(/,2021-

04-20)

平台包括来自

TCGA

和

GTEx

数据库的

9736

个肿瘤组织和

8587

个正常组织的

RNA

测

序

(RNA-seq)

数据

,

可对肿瘤和正常组织样本进行

肿瘤蛋白

53(tumorprotein53,TP53)

高突变

率是

OV

的分子特征

,

可驱动

OV

的发生

[14]

。在该

研究中

,

我们选用

Pearson

相关性分析探究

TEKT2

的表达与

TP53

的表达在

OV

中的相关性。

P<0.05

被视为具有相关性

,

统计分析通过

R

语言实现。

1.1.5TEKT2与免疫细胞的相关性分析

免疫细胞浸润的改变既可以促进

OV

的发

生

,

又与

OV

细胞的侵袭和转移密切相关

[15-16]

。因

此

,

分析肿瘤微环境的变化对于肿瘤分子机制的

探究有着重要的意义。

TIMER

数据库不仅可以分

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172

生命科学研究

圆园23

年

析免疫细胞的浸润丰度

,

而且提供了大量的拷贝

数变异数据。我们基于

TIMER

分析得到了

OV

免

疫微环境中免疫细胞浸润的丰度

,

应用

Pearson

相关性分析探究了

TEKT2

与免疫细胞浸润的关

系。考虑到

TEKT2

的拷贝数可能影响相关性分析

的结果

,

我们用方差分析探究了不同

TEKT2

拷贝

数变异类型

OV

患者中免疫细胞浸润的差异。

细胞活力

,

具体操作

:1)

应用胰蛋白酶消化

SK-

OV3

细胞

,

然后将肿瘤细胞接种于

96

孔培养板

中

,

每孔

10

3

~10

4

个

,

在

100滋L

的培养基中培养

;

2)

取培养

0h

、

24h

、

48h

、

72h

的

SKOV3-NC

和

SKOV3-shRNA,

弃掉培养基后每孔加入

10滋L

CCK-8

试剂培养

2h,

最后在酶标仪

450nm

处测

定吸光度

(A)

。根据如下公式计算细胞存活率

(R):

R=[(A

实验孔

-A

空白孔

)/(A

对照孔

-A

空白孔

)]伊100%,

绘制

出细胞的生长活力曲线

。实验进行

3

次重复

。

1.2实验验证

1.2.1细胞培养和病毒包装

人正常卵巢上皮细胞株

IOSE80

和

OV

细胞

株

SKOV3

均购自上海冠导生物工程有限公司

,

应用含有

10%

牛血清

(16140063,

美国

Gibco

公司

)

的

DMEM

培养基

(Gibco

公司

,

美国

)

培养

,

培养条

件

:CO

2

体积分数

5%,

温度

37益

。收集对数生长

期的

SKOV3

细胞

,

于细胞培养皿中生长至

60%

后

进行转染

。针对

TEKT2

构建的短发夹

RNA(short

hairpinRNA,shRNA)

慢病毒载体由湖北新纵科病

毒疾病工程技术有限公司提供

。采用

Lipofec-

tamine

TM

3000

转染试剂

(ThermoFisherScientific

公

司

,

美国

)

将

shRNA

慢病毒载体和

LV-MAX

TM

慢病

毒生产系统

(ThermoFisherScientific

公司

,

美国

)

转

染到

293T

细胞

(

广州吉妮欧生物科技有限公司

)

中

,

72h

后收集重组慢病毒溶液

。将

10滋L

重组慢病

毒溶液加入

SKOV3

细胞中

,24h

后形成

SKOV3-

shRNA

组。培养

SKOV3

细胞

24h

作为

SKOV3-

NC

组。

1.2.2Real-timePCR

应用

Trizol

试剂盒

(

上海生工生物工程股份

有限公司

)

提取

SKOV3

细胞和

IOSE80

细胞中的

RNA

。使用

EvoM-MLV

试剂盒

(

湖南艾科瑞生物

工程有限公司

)

进行反转录。采用

SYBR誖Green

1.3统计方法

应用

Rversion4.0.2

进行数据统计分析

,Gra-

计量资料用均数

依

标准

phPadPrism8.0

用于制图。

差

(x依s)

表示

,

两组间计量资料比较采用两样本单

因素方差分析

,

以

P<0.05

为差异有统计学意义

。

2结果

2.1TEKT2在OV中的表达

GEPIA2

数据库中各肿瘤的表达结果显示

,

相比于正常对照组

,TEKT2

在

OV

、胸腺瘤

(thymo-

ma,THYM)

和子宫内膜癌

(uterinecorpusendome-

trialcarcinoma,UCEC)

等肿瘤中的表达显著增高

(P<0.05),

而在肾嫌色细胞癌

(kidneychromophobe,

肺鳞癌

(lungsquamouscellcarcinoma,LU-KICH)

、

SC)

和睾丸生殖细胞肿瘤

(testiculargermcelltumor,

进一步

TGCT)

中的表达显著降低

(P<0.05)(

图

1A)

。

对

TEKT2

在

OV

组织和癌旁组织中的差异表达

进行分析

,

结果表明

,TEKT2

在

OV

中的表达明

显较高

(P<0.05)(

图

1B)

。

2.2TEKT2与OV和其他肿瘤预后的关系

TEKT2

在

Kaplan-Meier

绘图平台的

OV

预

后相关性分析结果显示

,TEKT2

的高表达与

OV

患者的总生存期

(overallsurvival,OS)

、无复发生存

期

(recurrence-freesurvival,RFS)

较好呈正相关

(log-

rankP<0.05,

图

2A~B)

。

TIMER

数据库中

TEKT2

的预后相关性分析结果显示

,TEKT2

的高表达与

CTACTGTGCTTG-3忆

。

GAPDH-F

引物序列

:5忆-T-

CAAGAAGGTGGTGAAGCAGG-3忆,GAPDH-R

引

物序列

:5忆-TCAAAGGTGGAGGAGTGGGT-3忆

。实

验进行

3

次重复

。

PCR

反应条件

:95益45s;94益

45s,50益45s,72益90s,40

个循环

;72益

延伸

10min

。用

2

-驻驻Ct

法计算

TEKT2

的相对表达量

。

1.2.3CCK-8检测细胞活力

使用

CCK-8

试剂盒

(Gibco

公司

,

美国

)

测定

ProTaqHS

预混型

qPCR

试剂盒

(

湖南艾科瑞生

物工程有限公司

)

进行

cDNA

的扩增。

TEKT2

和

GAPDH

的引物购自广州锐博生物技术有限公司。

TEKT2-F

引物序列

:5忆-AGACCTTGGAGGAGA-

TCGCT-3忆,TEKT2-R

引物序列

:5忆-CCCGAGAC-OV

患者预后较好呈正相关

(log-rankP=0.007,

图

2C)

。

GEPIA2

数据库的生存分析结果也表明

,

TEKT2

的高表达提示

OV

患者有较好的预后

(log-

此外

,TEKT2

与多种肿瘤患

rankP=0.006,

图

2D)

。

者预后的热图显示

,TEKT2

与肾上腺皮质癌

(adre-

结肠癌

(colonadeno-nocorticalcarcinoma,ACC)

、

carcinoma,COAD)

患者的预后较差呈正相关

,

而与

肾透明细胞癌

(kidneyrenalclearcellcarcinoma,

葡萄膜黑色素瘤

(uvealmelanoma,U-KIRC)

、

OV

、

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第

2

期

袁美莉等：多数据库联合探究

TEKT2

在卵巢癌中的作用

173

VM)

患者的预后较差呈负相关

(

图

2E)

。

2.3TEKT2可作为OV患者的独立预后因素

为了考察

TEKT2

是否为

OV

的独立预后因

素

,

我们进行了单因素

Cox

回归分析和多因素

单因素

Cox

回归分析结果显示

,

年

Cox

回归分析。

2.4TEKT2与TP53的表达密切相关

为了确定

TEKT2

是否具有

OV

治疗靶点的

潜力

,

我们探究了

TEKT2

与

TP53

在包括

OV

在

内的多种肿瘤中的相关性

,

结果显示

:

在多种肿

瘤中

,TEKT2

与

TP53

呈显著的正相关

(P<0.001,

图

3A);

在

OV

中

,TEKT2

与

TP53

仍然具有显著

的正相关关系

(P<0.001,

图

3B)

。

TEKT2

与

TP53

的

相关性分布图表明

,TEKT2

与

TP53

在

OV

中的相

关性明显较高

(

图

3C)

。

TEKT2

预后价值与

TP53

突

变类型的分析结果表明

,

在

TP53

突变型

OV

患者

中

,TEKT2

与患者预后没有明确的关系

(P=0.130,

图

4A);

而在野生型

TP53OV

患者中

,TEKT2

的

高表达与患者预后较好呈正相关

(P=0.002,

图

4B)

。

*

龄

[

风险比

(hazardratio,HR)=1.025,P<0.001]

、

CD4

+

T

细胞

(HR=0.002,P=0.006)

和

TEKT2(HR=0.804,

P=0.009)

与

OV

患者的预后关系密切

(

表

1)

。多因

素

Cox

回归分析结果也表明

,

年龄

(HR=1.024,P<

中性粒细

0.001)

、

CD4

+

T

细胞

(HR=0.021,P<0.001)

、

胞

(HR=5.054,P<0.001)

、树突状细胞

(HR=0.002,

P=0.012)

和

TEKT2(HR=0.815,P=0.031)

与

OV

患

者的预后关系密切

(

表

2)

。

210

180

150

120

90

60

30

0

(A)

6

5

4

3

2

1

0

T(n=426)N(n=88)

图1TEKT2在包括OV在内的多种肿瘤中的差异表达分析

(A)TEKT2在多种肿瘤中的差异表达分析;(B)TEKT2在OV中的差异表达分析。T:肿瘤组织;N:癌旁组织;

*

:P<0.05。

Fig.1DifferentialexpressionanalysisofTEKT2invariouscancersincludingOV

(A)ThedifferentialexpressionanalysisofTEKT2inavarietyoftumors;(B)ThedifferentialexpressionanalysisofTEKT2inOV.

T:Tumortissue;N:Paracanceroustissue;

*

:P<0.05.

Table1

Age

Blackrace

Whiterace

Purity

Bcell

CD8

+

Tcell

CD4

+

Tcell

Neutrophil

Dendriticcell

TEKT2

Item

(B)

表1TEKT2与临床特征的单因素Cox回归分析结果

UnivariateCoxregressionanalysisresultsofTEKT2andclinicalcharacteristics

Coefficient

0.024

0.484

0.177

-0.381

-1.845

-0.481

-6.337

0.565

-0.986

-0.218

HR

1.025

1.622

1.193

0.683

0.158

0.618

0.002

1.759

0.373

0.804

95%CI_low

1.015

0.639

0.531

0.280

0.001

0.059

0

0.049

0.067

0.682

95%CI_up

1.035

4.119

2.682

1.665

17.515

6.524

0.167

6.585

2.076

0.947

Pvalue

<0.001

0.309

0.669

0.402

0.443

0.689

0.006

0.757

0.260

0.009

注:HR,风险比;CI,置信区间

。

Notes:HR,hazardratio;CI,confidenceinterval.

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174

Table2

Age

Blackrace

Whiterace

Purity

Bcell

CD8

+

Tcell

CD4

+

Tcell

Neutrophil

Dendriticcell

TEKT2

Item

生命科学研究

圆园23

年

表2TEKT2与临床特征的多因素Cox回归分析结果

MultivariateCoxregressionresultsofTEKT2andclinicalcharacteristics

Coefficient

0.024

0.290

-0.051

-1.512

3.713

-3.442

-16.111

1.738

-6.340

-0.218

HR

1.024

1.330

0.950

0.220

0.409

0.032

0.021

5.054

0.002

0.815

95%CI_low

1.013

0.517

0.417

0.063

0.046

0.001

0

9.377

0

0.660

95%CI_up

1.035

3.453

2.164

0.776

3.660

1.740

0

27.274

2.520

0.980

Pvalue

<0.001

0.549

0.903

0.018

0.284

0.091

<0.001

<0.001

0.012

0.031

注:HR,风险比;CI,置信区间

。

Notes:HR,hazardratio;CI,confidenceinterval.

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

Expression

Low

High

0

050

Numberatrisk

Low1194280

High462148

OS

HR=0.76(0.65~0.87)

log-rankP约0.001

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

Expression

Low

High

0

050

RFS

HR=0.78(0.66~0.93)

log-rankP=0.005

100

57

40

t/months

(A)

150

9

9

200

2

0

250

0

0

Numberatrisk

Low32355

High459138

100

t/months

(B)

12

18

150

2

0

200

1

0

1.00

0.75

0.50

0.25

0

0

log-rankP=0.007

Level

High(top50%)

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

Low(bottom50%)

LowTEKT2group

HighTEKT2group

log-rankP=0.006

HR(high)=0.71

P(HR)=0.0058

n(high)=211

n(low)=212

50100150

Timetofollow-up(months)

(C)

0

0

ENSG.11(TEKT2)

50100150

Timetofollow-up(months)

(D)

log

10

(HR)

0.5

0

-0.5

图2TEKT2表达与肿瘤预后的关系

(A)Kaplan-Meier绘图平台分析TEKT2对OV患者总生存期的影响;(B)Kaplan-Meier绘图平台分析TEKT2对OV患者无

复发生存期的影响;(C)TIMER数据库分析TEKT2对OV患者总生存期的影响;(D)GEPIA2数据库分析TEKT2对OV患

者总生存期的影响;(E)TEKT2在GEPIA2中与多种肿瘤预后的关系

。

Fig.2TherelationshipbetweenTEKT2expressionandtumorprognosis

(A)AnalysisoftheimpactofTEKT2onOSofOVpatientsbyKaplan-Meierplotplatform;(B)AnalysisoftheimpactofTEKT2

onRFSofOVpatientsbyKaplan-Meierplotplatform;(C)AnalysisoftheimpactofTEKT2onOSofOVpatientsusingTIMER

database;(D)AnalysisoftheimpactofTEKT2onOSofOVpatientsusingGEPIA2database;(E)TherelationshipbetweenTEKT2

andtheprognosisofmultipletumorsbasedonGEPIA2database.

(E)

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第

2

期

袁美莉等：多数据库联合探究

TEKT2

在卵巢癌中的作用

175

2.5TEKT2与肿瘤纯度、免疫细胞密切相关

本研究从

TEKT2

的表达和拷贝数变异角度

探究了其与免疫细胞浸润的相关性。

TEKT2

与肿

n=9712,r=0.14(Pearson),P约0.001

5

0

-5

-10

-10-505

ExpressionofTEKT2[log

2

(TPM)]

(A)

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

0

-0.2

-0.4

-0.6

-0.8

-1.0

瘤纯度及免疫细胞的相关性分析结果显示

,

其与

肿瘤纯度、巨噬细胞和中性粒细胞均具有显著相

关性

,

其中与中性粒细胞的相关性最强

(

图

5)

。

TE-

n=422,r=0.25(Pearson),P约0.001

5

0

-5

-10

-10-505

ExpressionofTEKT2[log

2

(TPM)]

(B)

OV

0.010.10

图3TEKT2与TP53的相关性

(A)TEKT2在多种肿瘤中与TP53相关性的分析;(B)TEKT2在OV中与TP53相关性的分析;(C)TEKT2在多种肿瘤中与

TP53相关性的定位。

Fig.3CorrelationbetweenTEKT2andTP53

(A)AnalysisofthecorrelationbetweenTEKT2andTP53inmultipletumors;(B)AnalysisofthecorrelationbetweenTEKT2and

TP53inOV;(C)LocalizationofthecorrelationbetweenTEKT2andTP53inmultipletumors.

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

Expression

Low

High

0

Low

High

Numberatrisk

13123

37595

10.00

-log

10

P

(C)

1000.00

TP53-mutated

HR=0.82(0.63~1.06)

log-rankP=0.130

1.0

0.8

0.6

0.4

0.2

Expression

Low

High

0

Numberatrisk

5025

4434

TP53-wild

HR=0.43(0.25~0.75)

log-rankP=0.002

050100150

t/months

3

11

200

0

1

250

0

0

02040

10

22

6080

t/months

4

11

100120140

1

2

0

1

0

0

图4TEKT2的预后价值与TP53突变的关系

(A)TEKT2在TP53突变型OV患者中的生存分析;(B)TEKT2在TP53野生型OV患者中的生存分析。

Fig.4TherelationshipbetweentheprognosticvalueofTEKT2andTP53mutation

(A)AnalysisofTEKT2onsurvivalofOVpatientswithmutatedTP53;(B)AnalysisofTEKT2onsurvivalofOVpatientswith

wildTP53.

(A)

0

2

Low

High

(B)

1

4

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176

生命科学研究

圆园23

年

2.6

KT2

的拷贝数变异与免疫细胞的相关性分析结果

显示

,TEKT2

的高扩增与

B

淋巴细胞的浸润相

关

,

而

TEKT2

的臂水平缺失与中性粒细胞的浸润

相关

(

图

6)

。

TEKT2的表达可影响OV细胞增殖

在上述研究中我们发现

,TEKT2

在

OV

中高

表达

,

而

TEKT2

高表达与

OV

预后较好呈正相

(

图

7B),

并采用

CCK-8

实验分析细胞的活性

,

结

果显示

,

从转染后

48h

开始

,SKOV3-shRNA

组

中细胞的增殖能力明显增高

(P<0.05,

图

7C)

。

3讨论

关。为了分析可能的机制

,

我们采用

CCK-8

实验

探究

TEKT2

对

OV

细胞增殖的调节作用。

Real-

timePCR

实验结果表明

,

与人正常卵巢上皮细胞

株

IOSE80

相比

,OV

细胞株

SKOV3

中

TEKT2

进一步应

mRNA

的表达显著增高

(P<0.05,

图

7A)

。

用慢病毒转染

SKOV3

细胞沉默

TEKT2

的表达

Purity

r=0.347

P=3.71E-15

Bcell

在过去的十几年中

,

高通量测序分析推动了

人们对

OV

分子机制的研究

,

使研究人员能够发

现

OV

的治疗靶点并将其应用于临床。

2018

年首

个

OV

靶向药物

PARP

抑制剂奥拉帕利的获批

,

全面开启了我国的

OV

靶向治疗时代。目前

,

常用

的临床

OV

靶向治疗药物主要有

:PARP

抑制剂

抗表皮生长因

奥拉帕利、

VEGF

抑制剂贝伐单抗

、

子受体

(epidermalgrowthfactorreceptor,EGFR)

的

CD8

+

Tcell

r=0.069

P=1.32E-01

CD4

+

Tcell

r=-0.06

P=1.87E-01

9

8

7

6

5

0.20.4

r=0.038

P=4.09E-01

0.60.81.00.05

9

8

7

6

5

0

Macrophage

r=-0.093

P=4.26E-02

0.100.1

Infiltrationlevel

0.20.30.120.160.20

Neutrophil

r=-0.173

P=1.41E-04

Dendriticcell

r=-0.087

P=5.56E-02

0.050.100.05

图5TEKT2与肿瘤纯度及免疫细胞浸润的相关性

Fig.5CorrelationbetweenTEKT2andtumorpurityandimmunecellinfiltration

OV

0.100.15

Infiltrationlevel

0.200.40.50.60.7

0.6

0.4

0.2

0

Bcell

**

*

Copynumber

Deepdeletion

Arm-leveldeletion

Diploid/normal

Arm-levelgain

Highamplication

CD8

+

TcellCD4

+

TcellMacrophageNeutrophilDendriticcell

图6TEKT2的基因拷贝数与免疫细胞浸润的相关性分析

与深度缺失组比较,

*

:P<0.05,

**

:P<0.01。

Fig.6CorrelationanalysisofTEKT2genecopynumberandimmunecellinfiltration

*

:P<0.05and

**

:P<0.01,comparedwithdeepdeletiongroup.

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第

2

期

袁美莉等：多数据库联合探究

TEKT2

在卵巢癌中的作用

3

2

1

0

*

177

4

3

2

1

***

4

3

2

1

0

0

SKOV3-NC

SKOV3-shRNA

*

*

IOSE80SKOV3

(A)

0

SKOV3-NCSKOV3-shRNA

(B)

24

t/h

(C)

4872

图7TEKT2对于OV细胞增殖的影响

(A)TEKT2在OV细胞株SKOV3和正常卵巢上皮细胞株IOSE80中的表达差异;(B)TEKT2在对照组(SKOV3-NC)和敲减

组(SKOV3-shRNA)的表达情况;(C)TEKT2敲减对OV细胞SKOV3增殖的影响

。

*

:P<0.05;

***

:P<0.001。

Fig.7EffectofTEKT2ontheproliferationofOVcells

(A)DifferentialexpressionofTEKT2inOVcelllineSKOV3andnormalovarianepithelialcelllineIOSE80;(B)TEKT2expres-

sioninthecontrolgroup(SKOV3-NC)andknockdowngroup(SKOV3-shRNA);(C)TheeffectofTEKT2knockdownonthepro-

liferationofSKOV3cells.

*

:P<0.05;

***

:P<0.001.

厄洛替尼

,

以及血管内皮生长因子受体

(vascular

血小板

endothelialgrowthfactorreceptor,VEGFR)

、

源性生长因子受体

(plateletderivedgrowthfactor

receptor,PDGFR)

和

c-kit(

酪氨酸激酶受体

)

等多

个受体的阻断剂帕唑帕尼

[17]

。这些靶向药物的应

用在一定程度上改善了

OV

患者的预后

,

但是进

展期

OV

患者的长期生存率仍然只有

10%~30%

[18]

。

因此

,

仅仅开发更多的靶向治疗药物并不足以攻

克癌症治疗的难题

,

对靶向治疗影响机制的探究

同样具有重要的意义。在该研究中

,

我们首次揭

示了

TEKT2

在

OV

中的作用

,TEKT2

在

OV

中高

表达

,

并可作为

OV

的独立预后因素。更重要的

是

,

我们的证据表明

TEKT2

不仅可抑制

OV

细胞

的增殖

,

而且与免疫细胞的浸润相关

。这提示

TEKT2

不仅与治疗靶点的阻断密切相关

,

而且有

可能影响免疫治疗的效果

。

目前

,

尚无研究揭示

TEKT2

在

OV

中的作

用。我们发现

,TEKT2

在

OV

中高表达

(

图

1

、图

7),

且与

OV

患者预后较好呈正相关

(

图

2)

。

Cox

回归

分析表明

,TEKT2

是

OV

的独立预后因素

(

表

1~2)

。

相关性分析显示

,TEKT2

与

TP53

的表达在包括

OV

的多种肿瘤中呈显著正相关

(

图

3),

且

TEKT2

高表达在野生型

TP53

患者中具有较好的预后价

值

(

图

4)

。

TP53

是一个关键的抑癌因子

,

可通过促

进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞增殖、调节免疫微

环境和抑制血管生成等过程影响包括

OV

在内的

多种肿瘤的进展

[14,19-20]

。

Leijen

等

[21]

通过大样本临

床研究发现

,TP53

突变可有效地改善卡铂的耐药

性。在该研究中

,

我们还通过

CCK-8

实验发现

TEKT2

可抑制

OV

细胞的增殖

(

图

7)

。因此

,

我们

推测

TP53

和

TEKT2

对

OV

细胞增殖的抑制具有

协同作用。

TP53

与

TEKT2

的具体互作机制有待

后续深入研究

。

此外

,

通过分析

TEKT2

与免疫细胞的相关

性

,

我们发现

TEKT2

与巨噬细胞和中性粒细胞密

切相关

(

图

5),

并且

TEKT2

的拷贝数变异与中性

粒细胞的浸润相关

(

图

6)

。巨噬细胞是人体免疫系

统的主要成员

,

在抗肿瘤免疫反应过程中发挥着

重要的作用

[22]

。传统的免疫治疗主要通过阻断免

疫检查点促进

T

细胞的抗肿瘤作用

,

近年来

,

越

来越多的研究者将目光投向了固有免疫细胞。例

如

,CD47

可通过抑制巨噬细胞促进

OV

的转移

,

而二氟甲基鸟氨酸

(difluoromethylornithine,DFMO)

和

5-

氮胞苷可通过促进

M1

巨噬细胞的浸润抑

制

OV

的发展

[23-24]

。我们发现

TEKT2

与中性粒细

胞和巨噬细胞相关

,

这说明

TEKT2

在固有免疫细

胞抗肿瘤的过程中发挥着重要的作用。然而

,

目

前关于

TEKT2

与免疫细胞浸润的关系尚不明确

,

因此进一步探究

TEKT2

的免疫调节作用很有可

能为

OV

的免疫治疗提供新的思路

。我们发现的

TEKT2

与固有免疫细胞的关系为

OV

治疗的研究

打开了新的大门

,

后续应用大样本基础研究对其

进行深入探讨很有必要。

总而言之

,

该研究首次揭示了

TEKT2

在

OV

中的保护机制。

TEKT2

不仅可抑制

OV

细胞的增

殖

,

而且与

TP53

具有协同抗癌作用。更重要的

是

,TEKT2

可能通过调节中性粒细胞和巨噬细胞

在固有免疫细胞抗

OV

过程中发挥作用。因此

,

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178

生命科学研究

圆园23

年

TEKT2

可从多个方面对

OV

发挥抑制作用。

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