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2024年12月28日发(作者：instructed language learning)
MMP-9
及
VCAM-1
的表达变化及意义肾癌组织中
MMP-2
、
赵志红
〔
摘
倪晓辰
要
〕
目的
仇炜张爱莉
（
河北医科大学附属第四医院泌尿外科
，
河北石家庄
050011）
采用
2，9（MMP-2、MMP-9）
及血管细胞黏附分子
1（VCAM-1）
的表达差异
。
方法探讨肾癌及癌旁肾组织中基质金属蛋白酶
-
2、MMP-9
及
VCAM-1
在肾癌及癌旁肾组织中的表达
，2
及
MMP-9
在肾癌及癌旁肾组织中明胶酶的
免疫组化法检测
MMP-
应用明胶酶图法检测
MMP-
活性
。
结果
2、MMP-9
及
VCAM-1
的表达阳性率较癌旁肾组织显著升高
（P＜0.01），2
及
MMP-9
的明胶酶活性肾癌组织中
MMP-
肾癌组织中
MMP-
MMP-2、MMP-9
及
VCAM-1
在肾癌组织中表达升高
，
可能促进肾癌的发病及进展
。
9202.2012.03.016〔
文章编号
〕1005-9202（2012）03-0479-02；doi：10.3969/.1005-
较癌旁肾组织也呈增高趋势
（P＜0.01）。
结论
〔
中图分类号
〕R737.2
〔
关键词
〕
肾癌
；
基质金属蛋白酶
2；
基质金属蛋白酶
9；
血管细胞黏附分子
1
〔
文献标识码
〕A
肾癌是我国常见的泌尿系统恶性肿瘤
，
其发病率近年有上
升趋势
。
基质金属蛋白酶
（MMPs）
可通过降解细胞外基质
〔1〕
2
和
MMP-9
是
（ECM），
促进恶性肿瘤的侵袭和转移
。MMP-
胞
＞75%
为
4
分
；51%～75%
为
3
分
；11%～50%
为
2
分
；
≤
10%
计为
1
分
；
阴性为
0
分
。
两项得分乘积
，0～3
分为阴性表
“－”；3
分以上为阳性表达
“+”。
达
1.4
明胶酶图分析称取约
30mg
液氮冻存标本裂解后蛋白
定量
，
各组均取
20
μ
g
蛋白与
5×
上样缓冲液
（0.1mmol/L
Tris-HCl，pH6.8，20%
甘油
，0.1%
溴酚蓝
，4%SDS）
混匀
，
上样
于凝胶
（
含
0.2%
明胶
）
加样孔内
。4℃
条件下恒压
（120V）
电
100
漂洗三次
，
泳
2～3h。
电泳结束后
，
凝胶经
2.5%TritonX-
每次
15min，
使明胶酶复性
；
弃去漂洗液
，
加入反应缓冲液
（50mmol/LTris-HCl，pH8.0，50mmol/LNaCl，10mmol/L
CaCl
2
）
中
，
于
37℃
下温育过夜
，
使明胶酶充分水解凝胶中的明
MMPs
家族成员
，
能够水解基底膜成分Ⅳ型胶原
，
促进肿瘤的浸
1）
参与多种细胞间的润与转移
。
血管细胞黏附分子
1（VCAM-
与肿瘤的浸润转移及免疫逃逸有密切关系
。
基于上述分黏附
，
子在恶性肿瘤进展中的重要作用
，
本研究通过检测并比较
MMP-2、MMP-9
和
VCAM-1
在肾癌及癌旁肾组织的表达情况
，
为肾癌的治疗和判断预后提供新思路
。
1
1.1
资料与方法
一般资料肾癌患者随机取自我院于
2009
年
4
月至
胶
。
之后经考马斯亮蓝染色
、
脱色液脱色至出现白色清晰条
带
。
然后使用凝胶成像系统进行成像并进行灰度扫描
。
1.5Western
印迹分析取上述定量后蛋白裂解液
20
μ
g
与
5×SDS
上样缓冲液
（0.1mmol/LTris-HCl，pH6.8，20%
甘油
，
0.1%
溴酚蓝
，10%
β
-4%SDS）
混匀
，
巯基乙醇
，
煮沸变性后经
SDS
聚丙烯酰胺凝胶电泳进行分离
。
经转膜
、5%
脱脂牛奶封
actin
的表达水平以
闭
、
一抗及二抗孵育和化学发光等检测β
-
作为上述明胶酶图的内参照
，
使用凝胶成像分析系统扫描其灰
度值
。
1.6
统计学分析计量资料以
x±s
或中位数及四分位距
（IQR）（
不符合正态性时
）
表示
，
所有数据均采用
SPSS13.0
统
计软件进行处理
。
计量资料两组间比较采用秩和检验
（Mann-
2
WhitneyU
检验
），
计数资料采用χ
检验
。
2010
年
2
月在泌尿外科住院病人
48
例
，
其中男
37
人
，
女
11
人
，
年龄
35～82
岁
，
平均年龄
（60.9±9.3）
岁
。
所有患者术前
均未进行治疗
，
经肾肿瘤根治性切除术后病理证实为肾透明细
胞癌
。
所有患者均于术后取癌及癌旁肾组织
。
之后快速切取
少量置于
10%
甲醛溶液中固定
，
其余组织立即投入液氮中保存
备用
。
1.2
主要试剂
9、VCAM-1
多克隆抗体
，
兔抗
MMP-
小鼠
MMP-2、actin
单克隆抗体均购自
SantaCruz
公司
，
β
-
免疫组化试
剂盒及
DAB
酶底物显色试剂盒购自北京中杉金桥公司
。
1.3
免疫组织化学方法
P
法检测
，
采用免疫组化
S-
石蜡包
3%
过氧化氢灭活内源性埋后切成
5
μ
m
厚的切片
，
脱蜡复水
，
过氧化物酶
，
抗原热修复
，
正常山羊血清封闭
，
依次滴加一抗
、
DAB
显色
，
二抗
、
辣根过氧化物酶标记链霉卵白素工作液孵育
，
苏木素复染
，
脱水
，
透明
，
中性树胶封片
。
以
PBS
代替一抗做阴
MMP-9、MMP-2
及
VCAM-1
表现棕褐色性对照
。
光镜下观察
，
或棕黄色阳性颗粒
。
半定量结果评定标准参考许良忠
〔2〕
2
结果
免疫组化结果显示
，
肾癌组织结构排列紊乱
，
缺乏典型
2、MMP-9
及
VCAM-1
阳性颗肾小管
、
肾小球等结构
，MMP-
粒均呈典型的棕褐色颗粒
，
而癌旁组织则仅有散在的棕褐色
2，MMP-9
及
VCAM-1
免疫组化结果表明颗粒
（
图
1）。MMP-
MMP-2、MMP-9
及
VCAM-1
在肾癌组织中表达升高
（P＜
0.01）（
表
1）。
明胶酶图结果显示
，
肾癌组织中
MMP-2
及
等报
道的方法
，
即染色强弱分数标准为
：
棕褐色
3
分
；
棕黄色
2
分
；
淡黄色
1
分
；
无着色
0
分
。
阳性细胞计数
：
一个视野内着色细
基金项目
：
河北省普通高等学校强势特色学科项目
），
通讯作者
：
张爱莉
（1965-
男
，
硕士生导师
，
主任医师
，
主要从事泌尿外
科学研究
。
），
第一作者
：
赵志红
（1968-
男
，
副主任医师
，
主要从事泌尿外科学研究
。
MMP-9
的明胶酶活性较癌旁组织明显升高
（P＜0.01）（
图
2，
2、MMP-9
及
VCAM-1
在肾表
1）。
因此上述结果提示
，MMP-
癌组织中表达水平增强
，
这些分子可能在肾癌的发生发展过
程中起到重要作用
。
·480·
图
1
肾癌组织及癌旁组织中
MMP-2、MMP-9
及
VCAM-1
的表达变化
（DAB，×100）
图
2MMP-2
及
MMP-9
在肾癌及癌旁组织的活性变化
（
明胶酶图分析
）
表
1MMP-2、MMP-9
及
VCAM-1
在肾癌及癌旁
组织中表达差异比较
（n=48）
检测方法检测项目肾癌组织癌旁组织
免疫组化
MMP-2+
40
1）
9
－839
MMP-9+
31
1）
7
－1741
VCAM-1+
28
1）
4
－2044
明胶酶图分析
MMP-2
四分位距
2.05（1.08，2.75）
1）
1.06（0.67，1.45）
MMP-9
四分位距
1.41（0.89，1.74）
1）
0.75（0.23，1.02）
与癌旁组织比较
：1）P＜0.01
中国老年学杂志
2012
年
2
月第
32
卷
3
讨论
肾癌的组织类型包括透明细胞癌
、
乳头状腺癌
、
嫌色细胞
癌
、
未分化癌等
，
其中透明细胞癌最为多见
。
肿瘤的浸润
、
侵袭
及转移能力是恶性程度的生物学基础
。
在肿瘤的浸润侵袭过
程中涉及多种细胞外基质与细胞分泌成分的相互作用
。
MMP-2
及
MMP-9
是两种常见的
ECM
水解酶类
，
它们可以通过
水解基底膜成分促进肿瘤细胞迁移与侵袭
，
因此它们是两种迁
移相关蛋白
，
与肿瘤细胞的侵袭性有关
。
以往研究表明
，
MMP-2
及
MMP-9
在多种肿瘤组织中高表达
〔2～5〕
，
但这些研究主
要通过免疫组织化学或
Western
印迹的方法对
MMPs
的表达量
进行检测
。
本研究中采用灵敏度高
、
价格低廉的明胶酶图法进
行检测
，
因此可以直接反映出肾癌组织中
MMP-2
及
MMP-9
的
明胶酶活性
。
结果表明
MMP-2
及
MMP-9
活性的增高可能与肾
癌的发病及恶性化密切相关
。VCAM-1
是一种细胞表面黏附分
子
，
它是介导肿瘤免疫的重要分子
〔6〕
。
本文结果显示
，VCAM-1
在肾癌组织中表达阳性率明显增加
，
因此推断
VCAM-1
的高表
达与肾癌也有密切联系
。
恶性肿瘤的个体化治疗是今后治疗手段改进的新趋势
。
检测每个病例肿瘤细胞特殊蛋白的表达谱对于评估疾病的特
点及制定个体化治疗策略具有重要意义
。
对于肾癌组织中高
表达某些特征性蛋白的患者
，
则可以通过药物或其他措施抑制
这些特征性蛋白的表达以达到更好的治疗效果
。
因此
，
方便高
效的检测手段是今后个体化治疗方案制定的前提
。
对于高表
达上述肿瘤相关蛋白的患者
，
在术后应用药物干预这些蛋白的
表达水平可能是降低肿瘤复发
、
延长患者生存率的有效手段
。
4
参考文献
1BrassartB，RandouxA，HornebeckW，tionofmatrixmetallo-
proteinase-2（gelatinaseA，MMP-2），membrane-typematrixmetallopro-
teinase-1（MT1-MMP）andtissueinhibitorofmetalloproteinases-2
（TIMP-2）expressionbyelastin-derivedpeptidesinhumanHT-1080fi-
brosarcomacellline〔J〕.ClinExpMetastasis，1998；16：489-500.
2
许良忠
，
杨文涛
.
免疫组织化学反应结果的判断标准
〔J〕.
中国癌症
杂志
，1996；6：229-31.
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withpoorprognosisofnasopharyngealcarcinoma〔J〕.BMCCancer，2010；
10：270.
4GersteinES，SiniL，RyabovAB，ativeenzymeimmunoassay
ofmatrixmetalloproteinases-2，-7，-9andtheirtissueinhibitor-2intumors
andplasmaofpatientswithgastriccancer〔J〕.BullExpBiolMed，2009；
148：899-902.
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torreceptor，E-cadherin，andmatrixmetalloproteinase-9inovarianepithe-
lialcancerandrelationtopatientdeaths〔J〕.AnnDiagnPathol，2010；
14：387-95.
eofvascularcelladhesionmolecule-1intumorimmunee-
vasion〔J〕.CancerRes，2007；67：6003-6.
〔2011-04-27
收稿
2011-10-26
修回
〕
（
编辑曹梦园
）
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