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2024年12月27日发(作者：如何设置滚动条长短)
放线菌的制片和观察
摘 要
放线菌与人类的生产和生活关系极为密切，目前广泛应用的抗生素约
70%是各种放线菌所产生。一些种类的放线菌还能产生各种酶制剂（蛋白酶、
淀粉酶、和纤维素酶等）、维生素（B12）和有机酸等。本实验通过在合成培
养基上接种放线菌，并用插片法对其形态进行观察，初步了解放线菌的形态
特征，观察并能区分其三种菌丝——基内菌丝、气生菌丝和孢子丝。最后的
清楚地观察到了青色链霉菌（Streptomyces glaucus）和弗氏链霉菌
（Streptomyces Fradiae）的三种菌丝形态特征。
关键词
放线菌 插片培养法 高氏（Gause）Ⅰ号培养基 孢子丝
前言
放线菌在气生菌丝上分化出可产生孢子的孢子丝，孢子丝的形状和排
列方式因种而异。成熟的孢子丝上产生成串的分生孢子。孢子的表面结构、
形状及颜色在一定条件下比较稳定，是鉴定菌种的重要依据。以无性孢子
和菌体断裂方式繁殖。绝大多数为异养型需氧菌。有的种类可在高温下分
解纤维素等复杂的有机质。在自然界分布很广，绝大多数为腐生，少数寄
生。产生种类繁多的抗生素，据估计，已发现的4000多种抗生素中，有
2/3是放线菌产生的。与人类关系十分密切。重要的属有：链霉菌属，小
单孢菌属和诺卡氏菌属等。
放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞。在显微镜下，放线
菌呈分枝丝状，我们把这些细丝一样的结构叫做菌丝，菌丝直径与细菌相
似，小于1微米。菌丝细胞的结构与细菌基本相同。大部分放线菌的菌体
由多细胞分枝状菌丝组成。菌丝大多无隔膜，其粗细与杆状细菌相似，直
径为1微米左右。细胞中具核质而无真正的细胞核，细胞壁含有胞壁酸与
二氨基庚二酸，而不含几丁质和纤维素。
1.材料与方法
1.1 材料
1.1.1 菌种
青色链霉菌（Streptomyces glaucus）、弗氏链霉菌（Streptomyces Fradiae）
1.1.2 溶液与试剂
硫酸亚铁溶液
1.1.3 仪器和其他用品
可溶性脂粉、硝酸钾、氯化钠、磷酸氢二钾、硫酸镁、琼脂、水（配制高氏
Ⅰ号培养基）；酒精灯、载玻片、盖玻片、显微镜、双层瓶（内装香柏油和
二甲苯）、擦镜纸、接种环、镊子、玻璃纸等。
1.2 方法
1.2.1高氏（Gause）Ⅰ号培养基的制备
称取可溶性淀粉 2g、KNO3 0.1g、K2HPO4 0.05g、MgSO4• 7H2O 0.05g、
NaCl 0.05g、FeSO4•7H2O 1mL（母液）、琼脂 2g、自来水 100mL、pH 7.2～
7.4。配制时，先用少量冷水，将淀粉调成糊状，倒入少于所需水量的沸水中，
在火上加热，边搅拌边依次逐一溶化其他成分，溶化后，补足水分到100ml，
调pH后灭菌20min，并包好四套培养皿，每个培养皿中放入四个盖玻片同时
灭菌。
1.2.2倒平板及接种
冷却后倒平板待平板冷却后，分别在四个培养皿中接种，采用密集划线
接种。
1.2.3 插片
无菌操作用镊子取灭菌盖玻片以约45°角插入平板琼脂接种线上。
1.2.4 培养
将平板倒置，于28℃培养7天。
1.2.5 镜检
用镊子小心取出盖玻片，用纸擦去背面的培养物，有菌面朝上放在载玻
片上，通过显微镜直接用低倍镜和高倍镜观察。
2. 结果与讨论
2.1 结果
图一 青色链霉菌
2.2 讨论
图二 弗氏链霉菌
根据菌丝的着生部位、形态和功能的不同，放线菌菌丝可分为基内菌
丝、气生菌丝和孢子丝三种。
1.基内菌丝(substrate mycelium) 链霉菌的孢子落在适宜的固
体基质表面，在适宜条件下吸收水分，孢子肿胀，萌发出芽，进一步向基
质的四周表面和内部伸展，形成基内菌丝，又称初级菌丝（primary
mycelium）或者营养菌丝（vegetative mycelium），直径在0.2～0.8微
米之间，色淡，主要功能是吸收营养物质和排泄代谢产物。可产生黄、蓝、
红、绿、褐和紫等水溶色素和脂溶性色素。
2.气生菌丝（aerial mycelium）是基内菌丝长出培养基外并伸
向空间的菌丝，又称二级菌丝（secondary mycelium）。在显微镜下观察
时，一般气生菌丝颜色较深，比基内菌丝粗，直径为1.0～1.4微米，长
度相差悬殊，形状直伸或弯曲，可产生色素，多为脂溶性色素。
3.孢子丝（spore hypha）是当气生菌丝发育到一定程度，其顶端分化出
的可形成孢子的菌丝，叫孢子丝，又称繁殖菌丝。孢子成熟后，可从孢子丝
中逸出飞散。放线菌孢子丝的形态及其在气生菌丝上的排列方式，随菌种不
同而异，是链球菌菌种鉴定的重要依据。孢子丝的形状有直形、波曲、钩状、
螺旋状，螺旋状的孢子丝较为常见，其螺旋的松紧、大小、螺数和螺旋方向
因菌种而异。孢子丝的着生方式有对生、互生、丛生与轮生（一级轮生和二
级轮生）等多种，本实验中青色链霉菌（Streptomyces glaucus）的孢子丝
为螺旋状、弗氏链霉菌（Streptomyces Fradiae）的孢子丝为直形。
3. 问题与讨论
1）由于普通光学显微镜的局限性，可以再观察时在盖玻片菌体附着部位滴加
0.1%吕氏碱性美兰染色后观察效果更好。
2）另外两种放线菌制片法 A．玻璃纸法
a) 铺玻璃纸：无菌操作用镊子将以灭菌（155-160℃干热灭菌2h）玻璃纸片
（盖玻片大小）平铺在高氏Ⅰ号培养基平板表面，用接种铲或无菌玻璃涂
棒将玻璃纸压平并去除气泡，每个平板可铺约10块玻璃纸。
b) 接种：无菌操作分别由青色链霉菌和弗氏链霉菌高氏Ⅰ号培养基平板培
养物挑取菌种在玻璃纸上划线接种。
c) 培养：将平板倒置，于28℃培养3-5天。
d) 镜检：在载玻片中央滴一小滴水，用镊子从平板上取下玻璃纸片，菌面朝
上放在水滴上，使其紧贴在载玻片上，勿留气泡，通过显微镜直接用低倍
镜和高倍镜观察。
B．印片法
i. 印片：用解剖针分别由青色链霉菌和弗氏链霉菌高氏Ⅰ号培养基平板培
养物划一小块菌苔置于载玻片上，菌面朝上，用另一载玻片轻轻在菌苔表
面按压，使孢子丝及气生菌丝附着在载玻片上。
ii.
iii.
iv.
固定：将有印记的一面朝上，通过火焰2-3次固定。
染色：用石炭酸复红染色1min，水洗，晾干。
镜检：用油镜观察孢子丝形态。
参考文献
沈萍 陈向东 《微生物学实验》 第72—73页
沈萍 陈向东 《微生物学》 （第二版） 第372—374页
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