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2024年12月29日发(作者：个人简历模板代码)
生工RNA提取试剂盒
UNIQ-10柱式Trizol总RNA抽提试剂盒
产品编号：SK1321/SK1322
包装规格：20次/100次
试剂盒组成
组分 SK1321，20次 SK1322，100次
纯化套件（吸附柱+收集管） 20套 100套
Trizol Reagent 12 ml 60 ml
RPE Solution 5 ml 25 ml
DEPC-treated ddH2O 1 ml 5 ml
操作手册1份1份
保存方法及注意事项
试剂盒于常温运输，试剂请按照要求分别保存。有效期见包装。
Trizol是强腐蚀性物质，操作过程中应穿上实验服，戴好乳胶手套，
避免沾染皮肤、眼睛和衣服，防止吸入口鼻。沾染皮肤或眼睛后，请
立即用清水或生理盐水冲洗，必要时寻求医生的帮助。
产品介绍
该试剂盒采用Trizol提取总RNA，得到的总RNA通常不含有
siRNA、 snRNA、5.8S rRNA、5S rRNA和tRNAs等200 nt以下的
RNA。该试剂盒采用的Trizol具有超强的裂解能力和抽提灵敏度，结
合试剂盒采用特殊的吸附膜，大大增强了RNA 的得率。得到的RNA
纯度好，完整性高。该试剂盒适用于各种细胞或组织中的RNA的抽提，
提取的总RNA没有DNA和蛋白污染，可用于Northern blot、Dot
blot、poly A筛选、体外翻译、RNase保护分析和分子克隆。本产品
具有以下特点：
1. 适用范围广。
2. 操作简单快速，整个过程20分钟左右完成。
3. 纯度高，污染少。
试剂准备
1. 自备试剂：无水乙醇、氯仿等。
2. 按瓶身标签说明在RPE Solution中加入4倍体积的无水乙醇，
混匀后在瓶身做好标记。于室温密封保存。每次使用后将
瓶盖盖紧，以保持RPE Solution中的乙醇含量。若RPE Solution
由于运输或保管不当造成容量不准，请用量筒定容后再加入相应体积
的无水乙醇。
3. 去酶处理：RNase是导致RNA降解最主要的物质，非常稳定。
在一些极端的条件可暂时失活，限制因素去除后又迅速
复性。常规的酸、碱以及加热方法不能使RNase完全失活。
RNase广泛存在于人的皮肤上和体液及环境中，因此制备RNA时必须
经常更换手套，同时戴上一次性口罩和卫生帽，并保证环境清洁。塑
料制品、玻璃和金属物品、实验仪器等可以使用生工生产的固相
RNase清除剂去除RNase（RT4201），对于实验溶液试剂的处理可
以使用生工生产的液相RNase清除剂（RT4202）。
4. 样品保存：匀浆后，加氯仿前，样品可在-70°C放置一个月以
上；提取的RNA样品可以在70%酒精中-20°C保存2个星期
以上；如果需要长期保存，请于超低温冰箱中保存。
样品准备
1. 植物组织或真菌：取新鲜样品在液氮中充分研磨或将其剪碎后
直接在Trizol中研磨。约50 mg样品使用0.5 ml Trizol。
研磨要迅速，最好不要超过1分钟。
对于丝状真菌也按照50 mg/0.5 ml Trizol进行上述处理。
2. 动物组织：取新鲜或-70°C冻存组织，每15~25 mg 组织加入
0.5 ml Trizol，用匀浆器匀浆处理。
样品体积一般不要超过Trizol 体积的10%。
3. 单层培养细胞的收集：可直接在培养容器中裂解（培养面积不
超过0.5×10 cm2，细胞不超过1×107），或者使用胰蛋白
酶处理后离心收集细胞沉淀。
a. A. 直接裂解法：直接在培养板中加入Trizol裂解细胞，每
0.5×10 cm2面积加0.5 ml Trizol。用移液器吹打混匀。
Trizol加量根据培养板面积决定，而不是由细胞数决定，如果加入
的量不够，将导致提取的RNA中有基因组DNA污染。
b. B. 胰蛋白酶处理法：收集细胞并大致确定细胞数量，用PBS洗
涤细胞后，向细胞中加入含有0.1~0.25%胰蛋白酶的
PBS 处理细胞，当细胞脱离容器壁后，加入含有血清的培养基失
活胰蛋白酶，将细胞溶液转移至无RNase的离心管中，5,000 rpm 离
心5 min，收集细胞沉淀，去除上清。每0.5×10 cm2面积加0.5 ml
Trizol。用移液器吹打混匀。收集细胞时一定要将细胞培养液去除干净，
否则裂解不完全，降低RNA得率。
4. 细胞悬液：离心收集细胞。每5×106-107动物、植物和酵母细
胞或每5×107细菌细胞加入0.5 ml Trizol。
加入Trizol前不要洗涤细胞，以免降解mRNA。
对于难以裂解的酵母和革兰氏阳性菌需要液氮研磨或匀浆器匀浆。
5. 血液处理：取0.25 ml新鲜或冻溶的血液，12,000 rpm 离心5
min，去除血浆，加入0.5 ml Trizol，充分振荡混匀。
标准抽提步骤
1. 将裂解后样品或匀浆液室温放置5-10 min，使得核蛋白与核酸
完全分离。
样品中如含有较多的蛋白质、多糖、脂肪或其他细胞外基质，可
以12,000 rpm 离心10分钟，移去漂浮的油脂，取上清。
2. 加入0.2 ml 氯仿，剧烈振荡30 sec，室温放置3 min。12,000
rpm 4°C离心10 min。
如不能旋涡混匀，可手动颠倒混匀2分钟。
样品会分成三层：上层水相，中间层和下层有机相。RNA 在上层
水相中。
3. 吸取上层水相转移至干净的离心管中，加入1/2倍体积无水乙
醇，混匀。
不要吸取任何中间层物质，否则会出现染色体DNA污染。
加入无水乙醇后，可能会产生半透明纤维状悬浮物，不影响提取
和应用。
4. 将吸附柱放入收集管中，用移液器将溶液和半透明纤维状悬浮
物全部加至吸附柱中，静置2 min，12,000 rpm离心3 min，
倒掉收集管中废液。
5. 将吸附柱放回收集管中，加入500 μl RPE Solution，静置2
min，10,000 rpm 离心30 sec，倒掉收集管中废液。
RPE
Solution使用前请检查是否按比例加入无水乙醇。
6. 重复步骤5一次。
7. 将吸附柱放回收集管中，10,000 rpm 离心2 min。
此步绝不可省略，否则残余的乙醇会严重影响得率和后续实验。
8. 将吸附柱放入干净的1.5 ml离心管中，在吸附膜中央加入30
μl DEPC-treated ddH2O，静置5 min，12,000 rpm 离心2
min，将所得到的RNA溶液置于-70°C保存或用于后续试验。
RNA在-70°C保存，以防降解。
若想提高RNA得率，可重复步骤8一次。
请勿使用小于30 μl的洗脱液进行洗脱。
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