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2024年4月24日发(作者:transformer是啥)

AKTApurifier简要操作说明

打开仪器的主电源,打开电脑电源。待仪器自检完毕(CU950上面的3个指示灯

完全点亮并不闪烁)。双击桌面上UNICORN图标,进入操作界面。

Unicorn Manager文件管理、Method Edit方法编辑、System Control系统控

制、Evalution结果处理,4个窗口同时打开,同时关闭。

Unicorn Manager中Manual运行的结果自动保存在Manualruns的文件夹中,

文件名从Manualrun1~Manualrun10,第11个结果会覆盖第1个文件(最多保存10个

默认的文件名)。如果手动结果需要长期保存,可以remove到指定文件夹或者rename。

可以利用Manual-other-record-on(off)来选择文件夹,制定文件名保存手动结果。

手动命令(Manual)见《ÄKTA系统手动命令指南》

利用脱盐实验熟悉手动操作(System Control→Manual)

脱盐试验原理:凝胶过滤 (或称分子筛) 层析是一种由限制分子通过多孔基质,按分

子大小分离混合分子的技术 。蛋白质是生物大分子,分子量比盐等小分子大许多倍,用凝

胶过滤方法为生物产品脱盐十分简单、可靠 。由于层析方法可透过紫外和电导检测器监控

整个层析脱盐的过程。Sephadex G-25 介质用带3- 氯-1 ,2- 环氧丙烷

(epichlorohydrin) 交联葡聚糖加工成珠状的介质。适合分子量在5000 以下的生物分子

的脱盐及缓冲液置换工作。在该实验中,蛋白质是大分子,盐离子是小分子,因此蛋白质

先出来(280nm有特征吸收),盐离子后出来(电导值显示)

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o 样品:5mg/mLBSA,0.5M NaCl溶液 10mL

o binding buffer缓冲液:去离子水

o 层析柱:HiTrap Desalting 5 mL

o 流速:5mL/min,

o 样品体积:200ul/0.5mL/1mL。

操作:

1)准备工作溶液和样品

所有的工作溶液和样品必须经过0.45µm的滤膜过滤,使用前用低频超声脱气

10min。

2)清洗及管道准备

首先将A1管道放入binding buffer中,在System Control窗口点击工具栏内的

Manual,选择 Pump→Pump wash purifier,选中A1管道为ON, Execute。泵清洗

将自动结束。

3)安装层析柱:

在Manual里选择Pump→Flow rate,输入流速5mL/mL,Execute,读取系统空压

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