螺甾烷基糖苷晶体

(19)中华人民共和国国家知识产权局

(12)发明专利说明书

(21)申请号 CN95194842.3

(22)申请日 1995.05.04

(71)申请人 辉瑞大药厂

地址 美国纽约

(72)发明人 D·J·阿兰 R·A·布佐恩 M·P·德尼诺 H·A·小沃森 J·B·朱格

(74)专利代理机构 中国国际贸易促进委员会专利商标事务所

代理人 全菁

(51)

C07J71/00

A61K31/58

(10)申请公布号 CN 1156458 A

(43)申请公布日 1997.08.06

权利要求说明书 说明书 幅图

(54)发明名称

螺甾烷基糖苷晶体

(57)摘要

高度结晶形式的(3β，5α，25R)-3-

[(β-D-4″，6″-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维

素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮，可用作降

血胆甾醇剂或抗动脉粥样硬化剂。

法律状态

法律状态公告日

法律状态信息

法律状态

权 利 要 求 说 明 书

1.一种结晶螺甾烷基糖苷,包括:具有下面的X-射线衍射D-间距的(3β,5α,25R)-3-

[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮:

形式A20个最大峰的d-间距

21.1017.4613.5810.496.986.786.606.345.775.525.355.124.824.534.374.123.823.553.443.

37

或

形式B12个最大峰的d-间距

19.9617.1115.149.977.576.626.095.365.154.904.573.77

2.根据权利要求1所要求的结晶螺甾烷基糖苷,它具有以下的X-射线衍射d-间距:

形式A20个最大峰的d-间距

21.1017.4613.5810.496.986.786.606.345.775.525.355.124.824.534.374.123.823.553.443.

37

3.根据权利要求2所要求的结晶螺甾烷基糖苷,其中形式A具有图1所示的衍射

图。

4.根据权利要求1所要求的结晶螺甾烷基糖苷,它具有以下的X-射线衍射d-间距:

形式B12个最大峰的d-间距

19.9617.1115.149.977.576.626.095.365.154.904.573.77

5.根据权利要求4所要求的结晶螺甾烷基糖苷,其中形式B具有图2所示的X-射

线衍射图。

6.一种用于治疗哺乳动物的血胆甾醇过多或粥样硬化的药物组合物,它包括药物

有效量的根据权利要求1的结晶螺甾烷基糖苷和药物上可接受的载体。

7.一种治疗哺乳动物的血胆甾醇过多或粥样硬化的方法,该方法包括对患有血胆

甾醇过多或粥样硬化的哺乳动物施用药物有效量的权利要求1的结晶螺甾烷基糖苷。

8.一种制备结晶的甾族糖苷的方法,包括让(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯

基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮在乙酸乙酯或乙腈中混合,然后形

成结晶的(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]-螺

甾烷-12-酮。

9.根据权利要求8所要求的方法,其中乙酸乙酯或乙腈溶液被加热和冷却时形成

晶体。

10.一种制备结晶的甾族糖苷的方法,包括让(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯

基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮在任选含有至多70%水的(C1-C4)

链烷醇中混合,然后形成结晶的(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]

纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。

11.根据权利要求10所要求的方法,其中溶剂是乙醇,异丙醇或正丙醇(30-70%)/水

(70-30%)和溶液被加热和经冷却后形成晶体。

说 明 书

发明背景

本发明涉及甾族糖苷和使用它们的方法,尤其用作哺乳动物的降血胆甾醇剂和抗动

脉粥样硬化剂。

许多具有降血胆甾醇活性的产物是交联的合成聚合物衍生物,如聚苯乙烯。例如,交

联的、水不溶性的、结合胆汁酸的聚苯乙烯基树脂,例如Cholestyramine(消胆胺)

试剂,具有砂质“口感”,和因此具有差的可口性。还有,这些树脂珠一般具有低的活体

内功效。因此,这些物质的有效降血胆甾醇剂量过多,一般18-24克配制的产物/1天。

具有降血胆甾醇活性的其它已知聚合物包括天然产物脱乙酰壳多糖和脱乙酰壳多糖

衍生物,如欧洲专利申请公开No.0212145中所述。然而,这些物质的有效降血胆甾醇

剂量也高。

其它已知的血胆甾醇过多控制剂包括植物提取物如“苜蓿皂草苷”。然而,这些植物

提取物的组成可变并含有大量的无用的化学物质。由于组成的可变性,很难设定标

准的剂量或预计所存在的杂质。因此,这一提取物不适合于由人施用。此外,这些提

取物的提纯也是昂贵的。作为替代物,某些以合成手段生产的纯“皂草配基衍生的”

化合物类,例如从螺甾烷、螺甾烯或甾醇衍生化合物合成的物质,比苜蓿提取物更高

效地降低胆甾醇吸收(按重量计)和因而能够以合理的剂量施用。由于这些物质的化

学组成是已知的和因为它们能够以高纯度合成,它们适合于由包括人在内的任何温

血动物用。

然而,除非大量地施用,纯皂草配基不会显著地抑制胆甾醇吸收。只有当与另一部分

复合时皂草配基才具有所需效果。此类皂草配基复合物的例子是惕告吉宁和薯蓣皂

苷配基的复合物,尤其它们的糖苷类。P.K.肯地亚,Iu.K.法斯兰考,G.M.高瑞努,V.A.波

贝可,I.V.苏提纳,N.E.马西肯括,药物杂志(.),1981,15(9),55公开了3-O-

(β-D-吡喃半乳糖基)核柯配基和其作为降血胆甾醇剂的用途。US专利No.4,602,003

和4,602,005公开了某些甾族糖苷,尤其3-O-(β-D-吡喃葡萄糖基)惕告吉宁和3-O-(β-

D-纤维素二糖基)惕告吉宁以及它们用于控制血胆甾醇过多的用途。与例如消胆胺

相比,3-O-(β-D-纤维素二糖基)惕告吉宁具有优异的降血胆甾醇作用。

同时,具有优异降血胆甾醇活性的其它甾族糖苷(例如,(3β,5α,25R)-3-[(β-D-纤维素二

糖基)氧基]螺甾烷-12-酮)公开于多国指定的以WO94/00480出版的PCT申请

PCT/US93/04092(它的公开内容被引入本文供参考)和1993年4月28日提交的多国

指定的US专利申请流水号08/054,449(现为PCT/US/00446),其中公开了

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-11-酮的结晶一水合物和其用作降血

胆甾醇剂和抗动脉粥样硬化剂的用途。

还有,多国指定的US专利申请流水号08/174,100和08/174,099(它们的公开内容被

引入本文供参考)公开了另外一些具有优异的降血胆甾醇活性的甾族糖苷(例如

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-12-

酮)。

因此,虽然已经有几种血胆甾醇过多控制剂,在本技术领域中仍然需要寻求替代试剂。

本发明概述

本发明的一个方面是涉及两种高度结晶形式(下文表示为A形式和B形式)的螺甾烷

基糖苷,它们可用作降血胆甾醇剂或抗动脉粥样硬化剂。该化合物是(3β,5α,25R)-3-

[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基[螺甾烷-12-酮并具有下面

的X-射线衍射D-间距:

形式A20个最大峰的d-间距

21.1017.4613.5810.496.986.786.606.345.775.525.355.124.824.534.374.123.823.553.443.

37

形式B12个最大峰的d-间距

19.9617.1115.149.977.576.626.095.365.154.904.573.77结晶形式A螺甾烷基糖苷是优

选的并具有以下d-间距:

形式A20个最大峰的d-间距

21.1017.4613.5810.496.986.786.606.345.775.525.355.124.824.534.374.123.823.553.443.

37结晶形式B螺甾烷基糖苷是本发明的另一方面并具有以下d-间距:

形式B12个最大峰的d-间距

19.9617.1115.149.977.576.626.095.365.154.904.573.77

本发明的另一方面是涉及用于治疗哺乳动物的血胆甾醇过多或动脉粥样硬化的药物

组合物,它包括上述结晶化合物和药物上可接受的载体。

本发明的再一方面是涉及通过对患有血胆甾醇过多或动脉粥样硬化的哺乳动物施用

治疗有效量的上述结晶化合物来治疗哺乳动物血胆甾醇过多或动脉粥样硬化的方法。

本发明的仍一方面是涉及制备上述结晶化合物的方法。该方法包括从合适的溶剂,

优选乙酸乙酯或乙腈中结晶。在该方法的一个优选的方面,(3β,5α,25R)-3-[(β-D-

4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮与足够量的乙酸乙

酯或乙腈混合足够的时间,经冷却后,获得结晶的(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟

苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮。

所以,本发明通过提供第一种(形式A)不吸湿的、热力学稳定的、高度结晶形式的

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-12-

酮和第二种(B形式)结晶形式的该化合物,它比第三种现有的结晶形式的该化合物具

有更高的热力学稳定性,得以在本技术领域中取得突出的进步。这些晶体有利于该

化合物的发展和管理审查。还有,本发明优选的结晶形式因其不吸湿性而具有优异

的可处理性和配制特性(例如制片)。相比之下,第三种现有的晶体形式的化合物是没

有可辨别形态的微晶体。后一种形式具有较低的热力学稳定性,因为它是无序晶胞

的晶体,并具有蜡状稠度(归因于它的吸温性)使它很难过滤、处理和配制。

从用来说明本发明实施方案的说明书和权利要求书以及从附图可以更清楚地看出本

发明的其它特征和优点。

附图简述

图1显示了本发明的第一种优选的晶体形式A的X-射线粉末衍射谱图。

图2显示了本发明的第二种晶体形式B的X-射线粉末衍射谱图。

本发明详述

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-12-

酮具有下式

式I的化合物在这里定义为具有式I所示绝对立体化学的单一对映体。

根据本发明,有两种高度结晶形式的式I化合物。通过参考表征本发明的高度结晶

形式的X-射线粉末衍射谱图的图1(形式A)和图2(形式B),能够更好地理解本发明。

在两个谱图中,强度(Y)(cps)对2θ(X)(度)描绘。这些X-射线粉末衍射谱是在室温条

件下用西门子衍射仪Model5000(Madison,Wisconsin)取下的。

两结晶形式A和B在形态上呈双锥形刀片(doublyterminatedblades)的形式。优选形

式A已被观察为棒状或双锥形刀片形式的混合物,然而,据信该棒是中间形态和刀片

是最终形态。因为以两结晶形态存在的形式A仍然具有同样的晶格,因而可以相信

任何一种形态都可以单独分离出来。优选形式A为不吸温的。形式B以水合或溶

剂合形式存在。还有,两结晶形式已被观察为薄片形。

上述化合物的优选的高度结晶形式A可根据以下操作程序来制备。基本上纯净(低

于约10%的杂质,排除残留的溶剂如水)的无定形或结晶(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双

-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮通过以下方法被转化成第

一种高度结晶形式A:通过将该无定形的或结晶的物质在合适的溶剂,优选乙酸乙酯

或乙腈中混合(例如溶解或淤浆化)(但很清楚的是转化成所需结晶形态包括将无定形

或结晶物质溶解和沉淀所需结晶形式),随后(重)结晶。

优选地,化合物对溶剂的浓度是约1∶100-约1∶1(按重量/体积,wt/Vol)。尤其优选

的是该浓度是约5∶100-约20∶100。

优选地,溶解温度是从室温(例如17-30°C)至回流温度变化,而60°C-回流温度更有效。

通常该高温保持约0.5小时至24小时。如果该高温用于溶解,则让所得到的悬浮液

冷却至室温,和将晶体粒化约0.5小时至60小时,然后通过普通方法,优选过滤和真空

干燥加以收集。

此外,起始物质可溶于第一种溶剂,如(C1-C6)烷基酮类,THF/环己烷,(C1-C4)链烷醇或

氯代烃类如二氯甲烷,优选四氢呋喃/环己烷3∶1,随后通过与乙酸乙酯或乙腈接触

而(重)结晶(例如在蒸馏过程中用第二种溶剂置换第一种溶剂)。

上述化合物的另一种高度结晶形式B可根据上述操作程序(包括在前面段落中的替

换操作程序),按照类似方法制备,不同的是使用(C1-C4)链烷醇(可以任意性地有至多

70%的水),如乙醇,异丙醇或正丙醇(30-70%)/水(70-30%),作为重结晶溶剂。

根据在1993年12月28日提交的多国指定的US专利申请流水号08/174,100(它的

公开内容被引入本文供参考)描述的方法来制备(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯

基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮。

尤其,所要求的化合物可按如下制备:

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]-2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素

二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮通过在约0°C-约100°C(通常在室温下)和约0.5磅/英寸

2(psi)-约50psi(通常为常压)下,在极性溶剂如甲醇、四氢呋喃、正丙醇或它们的混合

物中与亲核碱如甲醇钠或氰化钾混合约0.25小时-约2小时(通常0.5小时)而被脱乙

酰基,得到(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]-

螺甾烷-12-酮。

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮通过

在极性非质子传递溶剂如二甲基甲酰胺中在氯化亚铜存在下,在室温下与合适的异

氰酸酯(即,异氰酸2-氟苯基酯)混合2小时-约10小时而转化成氨基甲酰基部分,产生

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]-2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素

二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。

[(β-D-4′′,6′′-O-[4-甲氧基亚苄基]-2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素二糖基)氧基]-螺甾

烷-12-酮在二氯甲烷和甲醇的混合物中在室温下用三氟乙酸处理约2小时-约8小时,

制备(3β,5α,25R)-3-[(β-D-2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。

在无水的非质子传递溶剂如氯仿或二氯乙烷中,在催化量的强酸如樟脑磺酸存在下,

在回流条件和常压下使(3β,5α,25R)-3-[(β-D-纤维素二糖基)氧基1-螺甾烷-12-酮与茴

香醛二甲基缩醛反应约2-约6小时。在完成缩酮化之后,在约-20°C-约10°C的温度

下添加碱,优选胺类碱,如吡啶和酰化剂如氨乙酸酐,随后在室温下搅拌约1小时-约

12小时(通常约2小时),制备(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-O-[4-甲氧基亚苄基]-

2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。

(3β,5α,25R)-3-[(七乙酰基-β-D-纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮通过在约40-100°C

的高温(通常在回流温度下)和约0.5psi-约50psi(通常为常压)下,在溶剂如甲醇、四氢

呋喃、正丙醇或它们的混合物中与亲核碱如甲醇钠或氰化钾混合约0.25小时-约3

小时而被脱乙酰基,得到(3β,5α,25R)-3-[(β-D-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮。

通过在0.5-约4当量的氟化锌存在下,在约20°C-约100°C的温度下,让七乙酰基-β-

D-纤维素二糖基溴化物和(3β,5α,25R)-3-羟基-螺甾烷-12-酮在非质子传递的无水反

应惰性溶剂(例如乙腈)中进行偶联反应约0.5-约12小时而制得(3β,5α,25R)-3-[(七乙

酰基-β-D-纤维素二糖基)氧基]螺甾烷-12-酮。

上述反应的起始原料(例如全乙酰基化的糖卤化物)是容易获得的或能够由本技术领

域中的那些熟练人员使用有机化学的普通方法容易地合成。尤其,(3β,5α,25R)-3-羟

基-螺甾烷-12-酮(即核柯配基)可从SigmaChemicalCompany(西格玛化学公司),圣.路

易斯,MO或SteraloidsInc.,威尔顿(Wilton),N.H.购得。还有,从天然产物分离和提纯它

的方法描述在Rodd’sChemistryofCarbonCompounds(Rodd的碳化合物化学),S.考菲

()编,11卷,E部,pp1-53,1971。

本发明的化合物是胆甾醇吸收的有效抑制剂,因此适于在哺乳动物,尤其人类中作为

血胆甾醇过多控制剂的治疗用途。由于血胆甾醇过多与泛化的心血管、脑血管或末

梢血管疾病的发展有密切的关系,其次本化合物阻止粥样硬化(尤其动脉粥样硬化)的

发展。

本化合物的血胆甾醇过多控制活性可由基于标准操作程序的方法来说明。例如,本

化合物在抑制胆甾醇肠内吸收方面的活体内活性可由Melchoir(麦切尔)和

Harwell(哈威)(es.(脂类研究期刊),1985,26,306-315)的操作程序测定。

该活性可由在雄性叙利亚金仓鼠体内降低胆甾醇吸收的降血胆甾醇剂的量(相对于

对照物)来测定。在4天的时间让雄性叙利亚金仓鼠服用无胆甾醇的食物(对照动物)

或补充了1%胆甾醇和0.5%胆酸的食物。随后的一天该动物被绝食18小时,然后服

用1.5mL的含有0.25%甲基纤维素、0.6%吐温(Tween)80和10%乙醇的口服大丸药

(对照动物)或另外还含有所需浓度的待测试的化合物的口服大丸药。在大丸药服用

之后,立即让该动物接受第二批1.5mL的含有1%[3H]胆甾醇(2.0μCi/动

物;210dpm/nmol)和0.5%胆酸的液体状仓鼠食物的口服大丸药,和然后让动物绝食

24小时。在这第二次绝食时间过后,将动物杀死,切下肝脏,皂化,然后等分试样通过

添加过氧化氢来脱色,并分析放射性。根据所测定的肝脏重量来计算总肝脏放射性。

胆甾醇吸收率被表达为:大丸药服用24小时过后在肝脏中存在的以口服大丸药形式

服用的总放射活性的百分数。

该化合物的抵抗粥样硬化的效果(即活性和剂量)可由在雄性新西兰白兔的主动脉内

降低脂质沉积的本发明药物的量(相对于对照物)来测定。在1星期的时间为雄性新

西兰白兔喂含有0.4%胆甾醇和5%花生油的食物(一天一顿喂食)。1星期后一些白

兔(对照组)继续喂这些食物而剩余的白兔食用补充了所需浓度的待测试化合物的食

物。8.5星期之后,中断药物治疗和这些动物保持食用含胆甾醇食物达另外2个星期

之久,然后转变为无胆甾醇食物喂养5个星期。将动物杀死,从胸弓(thoracicarch)至

髂骨的分支取出主动脉。主动脉被清除外膜,纵向切开和然后按照霍尔曼(Holman)

等人所述用苏丹IV染色(.(实验室研究)1958,7,42-47)。被染色表面积的百

分数是通过使用OptimasImageAnalyzingSystem(图像处理系统)由光密度分析法来进

行定量。减少的脂质沉积可由在与对照兔比较的药物治疗组中被染色的表面积百分

数的减少来表示。

本发明的化合物可通过任何将化合物释放到肠腔的方法施用。这些方法包括口服,

十二指肠内途径,等。

施用的甾族糖苷的量当然取决于所治疗的主体,取决于疾病严重程度,取决于施用方

式和取决于药剂师的判断。然而,有效剂量范围是0.005-20mg/kg/天,优选0.01-

5mg/kg/天,最优选0.01-1mg/kg/天。对于平均70kg的人,这应该是0.00035-1.4g/天,

优选0.0007-0.35g/天,最优选0.0007-0.07g/天。

对于口服(它是优选的),该药物组合物可以是溶液,悬浮液,片剂,丸剂,胶囊剂,粉剂,缓

释配制剂和类似形式。

取决于预定施用方式,该药物组合物可以是固体,半固体或液体剂量形式,如片剂,丸剂,

胶囊剂,粉剂,液体剂,悬浮液,或类似形式,优选以适合于按精确剂量一次施用的单位

剂量形式。该药物组合物将包括普通的药物载体或赋形剂和本发明的化合物作为活

性成分。还有,它还可包括其它药物或药剂,载体,助剂等。

本发明的药物组合物可含有0.1-95%的该化合物,优选1%-70%的该化合物。在任何

情况下,被施用的组合物或配制剂将含有抗血胆甾醇过多或抗粥样硬化有效量的本

发明化合物。

对于固体药物组合物,常用的无毒固体载体包括,例如,药物级的甘露糖醇,乳糖,淀粉,

硬脂酸镁,糖精钠,滑石,纤维素,葡萄糖,蔗糖,碳酸镁和类似载体。

能够由以下方法制备液体药物组合物:通过溶解或分散,或另外制备本发明的甾族糖

苷并让它任意性地与药物助剂在载体如水、盐水、右旋糖水溶液、甘油、乙醇等中

混合,从而形成溶液或悬浮液。

用一定量的活性成分制备各种药物组合物的方法是已知的,或对于本技术领域中的

熟练人员来说是十分清楚的。例如,参见

Remington’sPharmaceuticalSciences.(Remington药物科学),Mack出版公司,Easter,Pa.,

第15版(1975)。

实施例1结晶(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧

基]-螺甾烷-12-酮如下所述(参见制备A1),(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨

基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(468g)从THF/环己烷(3∶1)中重结晶。

重结晶之后,将未干燥的饼溶于30°C的8.4升THF中,过滤和常压蒸馏(即在环境压

力下),用乙酸乙酯置换馏出物。当达到12升的最终体积且馏出物具有乙酸乙酯的

折光指数时,混合物被冷却至20-25°C,粒化一夜,过滤和干燥,获得363.3g的白色至灰

白色固体形式A的标题化合物,它属于薄片形式并是棒状和双锥形刀片形态的混合

物。这一优选的晶体(主要如上所述制备)的代表性X-射线衍射图给出在图1。按照

类似的方法,用乙腈替代乙酸乙酯来制备实施例1的产物。实施例2结晶

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-

酮将(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷

-12-酮(5g)溶于30°C的50mlTHF和100ml乙醇中,和常压蒸馏(即在环境压力下)。

当达到75ml的最终体积时,将混合物冷却至0-5°C,粒化一小时,过滤和干燥,获得

4.82g的白色至灰白色固体形式B的标题化合物,它是具有双锥形刀片形态的薄片。

这一晶体(主要如上所述制备)的代表性X-射线衍射图给出在图2。按照类似的方法,

用异丙醇替代乙醇来制备实施例2的产物。制备A1(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-

氟苯基氨基甲酰基]纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮氯乙酸酯的去保护将甲醇钠

(250mg)加入到(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]-2′,2′′,3′,3′′,6′-五

氯乙酰基-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(25g,17.7mmol)在THF(75mL)和甲醇

(75mL)中的溶液中。在室温下保持20分钟之后,通过添加乙酸(0.5mL)来停止反应。

在真空下溶剂体积减少一半和添加另外75mL的甲醇。在剧烈搅拌下,通过添加水

(75mL)沉淀产物。过滤固体,用1∶1甲醇∶水洗涤并干燥,得到15g粗产物。通过从

THF/环己烷/乙酸(3∶1∶0.1)中重结晶来提纯产物。m.p.272-273°C。

FABMS:1051(M+Na)+。对于C53H70F2N2O16+2H2O的分析计算

值:C59.76;H7.03;N2.62。实测值:C59.91;H7.32;N2.61。制备B1(3β,5α,25R)-3-[(β-D-

4′′,6′′-双-[2-氟苯基氨基甲酰基]-2’,2”,3’,3”,6’-五氯乙酰基纤维素二糖基)氧基]-螺甾

烷-12-酮使用氯化亚铜的氨基甲酰化在室温下将氯化亚铜(3.48g,36mmol)加入到

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮

(10.0g,8.8mmol)和异氰酸2-氟苯基酯(4mL,36mmol)在干燥二甲基甲酰胺(60mL)中

的溶液中。3小时后,混合物用乙酸乙酯(100mL)稀释并用1NHCl(2×)和盐水(1×)洗

涤,干燥(硫酸钠),过滤,和真空浓缩。将残余物溶于二氯甲烷(50mL)中并添加甲醇

(75mL)。真空除去二氯甲烷,和固体物从甲醇中沉淀下来。过滤固体,用甲醇洗涤和

干燥,获得10.6g无色固体形式的产物(86%)。m.p.212-214°C。

FABMS:1433(M+Na)+。

1HNMR(250MHz,CDCl3)δ7.9(m,2H);7.05(m,8H);5.35(dd,1H,J=8.0,7.0Hz);5.28(dd,1H,

J=9.0,8.0Hz);5.15(dd,1H,J=9.0,9.0Hz);5.05(dd,1H,J=9.0,8.0Hz);4.98(dd,1H,J=8.0,7.0Hz

);4.72(d,1H,J=9.0Hz);4.6(m,3H);4.4-

3.4(m,18H);3.35(dd,1H,J=10.0,9.0Hz);2.5(dd,1H,J=8.0,7.0Hz);2.35(dd,1H,J=13.0,12.0H

z);2.1(m,1H);2.1-

1.1(m,22H);1.05(d,3H,J=7.0Hz);1.02(s,3H);0.85(s,3H);0.77(d,3H,J=7.0Hz).制备

Cl(3β,5α,25R)-3-[(β-D-2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮对

-甲氧基亚苄基水解将三氟乙酸(19mL)加入到(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-O-[4-甲氧基

亚苄基[-2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(23.7g,0.019mol)

在二氯甲烷(150mL)和甲醇(50mL)中的溶液中。4小时后,混合物用水

(3×),NaHCO3(2×)和盐水(1×)洗涤,干燥(Na2SO4),浓缩。将残余物溶于最少量的乙酸

乙酯中和用己烷沉淀。过滤固体,用己烷洗涤和干燥,获得19.2g无色固体形式的产

物(90%)。m.p.224-226°C。FABMS:1159(M+Na)+。

1HNMR(250MHz,CDCl3)δ5.2(dd,1H,J=9.0,9.0Hz);5.1(dd,1H,J=9.0,9.0Hz);4.95(m,2H);

4.6(m,3H);4.2-

3.4(m,21H);3.35(dd,1H,J=9.0,9.0Hz);3.1(bs,1H);2.5(dd,1H,J=8.0,7.0Hz);2.35(dd,1H,J=1

3.0,12.0Hz);2.1(m,1H);1.9-

1.1(m,22H);1.05(d,3H,J=7.0Hz);1.02(s,3H);0.85(s,3H);0.77(d,3H,J=7.0Hz).制备

D1(3β,5α,25R)-3-[(β-D-4′′,6′′-O-[4-甲氧基亚苄基]-2′,2′′,3′,3′′,6′-五氯乙酰基-纤维素二

糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮对-甲氧基亚苄基的形成和氯乙酰化将樟脑磺酸(3g)加入到

(3β,5α,25R)-3-[(β-D-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(50g,0.066mol)和茴香醛二甲

基缩醛(50mL,0.29mol)在1,2-二氯乙烷(1500ml)中的混合物中。将该悬浮液加热至

回流温度和蒸发出20OmL的溶剂。在回流温度下4小时后,将凝胶化混合物冷却至

0°C并用吡啶(160mL,1.99mol)和氯乙酸酐(170g,1mmol)处理。让反应升温至室温,和

2小时后,混合物用1NHCl(3×),NaHCO3(1×)和盐水(1×)洗涤,干燥(硫酸钠),过滤和真

空浓缩。将残余物溶于最少量的乙酸乙酯中和用己烷沉淀。过滤固体,用己烷洗涤

和干燥,获得78.7g无色固体形式的产物(95%)。m.p.249-251°C。

FABMS:1277(M+Na)+。

1HNMR(250MHz,CDCl3)δ7.35(d,2H,J=9.0Hz);6.88(d,2H,J=9.0Hz);5.45(s,1H);5.3(m,2

H);5.0(m,2H);4.7(d,1H,J=7.0Hz);4.6(m,2H);4.3(m,2H);4.2(dd,1H,J=11.0,6.0Hz);4.2-

3.5(m,14H);3.8(s,3H);3.35(dd,1H,J=11.0,10.0Hz);2.5(dd,1H,J=8.0,7.0Hz);2.35(dd,1H,J=

13.0,12.0Hz);2.1(m,1H);2.1-

1.0(m,25H);1.05(d,3H,J=7.0Hz);1.02(s,3H);0.85(s,3H);0.77(d,3H,J=7.0Hz).制备

E1(3β,5α,25R)-3-[(β-D-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮脱酰化将甲醇钠(50mg)加

入到(3β,5α,25R)-3-[(七乙酰基-β-D-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮(5g,4.77mmol)

在THF(75mL)和甲醇(25mL)中的溶液中。将该溶液加热至温和地回流1小时。将

混合物冷却,浓缩至25mL。添加甲醇(10mL)和水(10mL),通过真空过滤收集沉淀物

并用1∶1甲醇∶水洗涤。产物在真空烘箱中干燥(80°C),获得2.9g无色固体形式的

标题化合物(80%)。m.p.>250°C。FABMS:755(M+H)+。对于C39H62O14+2H2O的

分析计算值:C59.22;H8.41。实测值:C59.54;H8.64。制备F1(3β,5α,25R)-3-[(七乙酰基

-β-D-纤维素二糖基)氧基]-螺甾烷-12-酮氟化锌促进的糖苷化(3β,5α,25R)-3-羟基-螺

甾烷-12-酮(3.0g,6.97mmol)和无水氟化锌(2.88g,27.9mmol)在干燥乙腈(175mL)中的

悬浮液通过蒸馏除去75mL的乙腈来进行干燥。让悬浮液冷却,添加七酰基-β-D-纤

维素二糖基溴化物(9.75g,13.9mmol),所得到的悬浮液在65°C下加热3小时。在冷却

至室温后,加入二氯甲烷(150mL)。搅拌10分钟和过滤。滤液真空浓缩得到10g粗

产物。将这一物质溶于8∶2氯仿∶甲醇中,预吸附在硅胶上和通过快速色谱分离法

(洗脱液:1∶1乙酸乙酯∶己烷)加以提纯,得到6.81g(93%)的标题化合物。m.p.220-

221°C。FABMS:1049(M+H)+。对于C53H76O21+0.5H2O的分析计算

值:C60.11;H7.34。实测值:C59.90;H7.24。应该理解,本发明并不限于以上给出和描

述的特定实施方案,在不脱离由如下权利要求书所定义的新型概念的精神和范围的

情况下可作各种变化和改进。