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2024年12月29日发(作者：地下城100源码)
琼脂糖凝胶纯化回收试剂盒(磁珠法)
目录号：DR01
DR0102
100次
溶胶液DD
漂洗液WB
洗脱缓冲液EB
磁珠悬浮液
室温
室温
室温
室温
50ml
试剂盒组成 保存
DR0103
200次
100 ml
25 ml 25 ml×2
第一次使用前按说明加指定量乙醇
15 ml
1.5ml
15 ml
1.5ml×2
保存条件：本试剂盒在室温储存12个月不影响使用效果。
储存事项:
1.
所有的溶液应该是澄清的，如果环境温度低时溶液可能形成沉淀，此时不应该直
接使用，可在37℃水浴加热几分钟，即可恢复澄清。使用前应该恢复到室温。
2.
储存于低温（4℃或者－20℃）会造成溶液沉淀，影响使用效果，因此运输和储
存均在室温下（15℃-25℃）进行。
3.
避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时
盖紧盖子。
- 1 -
产品介绍：
在高离序盐存在的情况下，DNA片断选择性的吸附于磁珠上，再通过一系
列快速的漂洗吸附的步骤，漂洗液将引物、核苷酸、蛋白、酶等杂质去除，最后
低盐、高pH值的洗脱缓冲液将纯净DNA从磁珠上洗脱。
产品特点：
1.
2.
磁珠之间吸附量差异极小，可重复性好。克服了国产试剂盒膜质量不稳定的弊端。
使用了优质溶胶液，不含传统溶胶液的碘化钠和高氯酸盐，不抑制回收后酶切、
连接克隆等下游反应。
3. 溶胶液调制成为了黄颜色，便于观察溶胶效果和监测pH值变化从而达到最佳结
合效果，大大提高回收效率。
自备仪器及试剂：1，小型离心机，2磁力架(博迈德)，3无水乙醇
注意事项：
1. 所有的离心步骤均在室温完成，使用转速可以达到13,000rpm的传统台式离心机，
如Eppendorf 5415C 或者类似离心机。
2. 溶胶液中含有刺激性化合物，操作时要戴乳胶手套，避免沾染皮肤，眼睛和衣服。
若沾染皮肤、眼睛时，要立即用大量清水或者生理盐水冲洗。
3.
4.
回收纯化的DNA片段一般在100bp到40kb之间，过长、过短片段的回收效率降低。
回收DNA的量和起始DNA的量、洗脱体积、DNA片断大小有关。一般1-20μg，
100bp-5kb的DNA片段，回收率可高达85％－95％。
5. 切胶回收时，紫外灯观察对DNA片段有损坏作用，应该尽可能使用能量低的长波
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紫外线，并且尽可能的缩短紫外线下处理的时间。
6. pH值≤7.5时，吸附膜吸附DNA的效率最高。如果切下来的凝胶中含有电泳缓冲液
太多，造成溶胶后溶胶液pH偏高，会导致回收率降低。溶胶后，如果溶胶液依旧
保持黄色，说明pH正常；如果变成橘红色或者淡紫色，说明pH偏高，可在胶充分
溶解后加5-10μl 3M醋酸钠（pH5.2）将pH值调到5-7（黄色）。
7. 洗脱液EB不含有螯合剂EDTA， 不影响下游酶切、连接等反应。也可以使用水
洗脱， 但应该确保pH大于7.5， pH过低影响洗脱效率。用水洗脱，DNA片段应
该保存在－20℃。DNA片段如果需要长期保存，可以用TE缓冲液洗脱（10mM
Tris-HCl，1mM EDTA，pH 8.0），但是EDTA可能影响下游酶切反应，使用时可以
适当稀释。
操作步骤：
提示：第一次使用前请先在漂洗液WB中加入指定量无水乙醇，加入后请及时打
钩标记已加入乙醇，以免多次加入!
1. 在长波紫外灯下，用干净刀片将所需回收的DNA条带切下，尽量切除不含DNA
的凝胶，得到凝胶体积越小越好。
2.
3.
将切下的含有DNA条带凝胶放入1.5ml离心管，称重。
加3倍体积溶胶液DD。（凝胶重为100mg，则加入300μl溶胶液）
如果凝胶浓度大于2％，应加入6倍体积溶胶液。
4.
5.
56℃水浴放置10分钟（或直至胶完全溶解）。每2-3分钟涡旋震荡一次加速溶解。
将上一步所得上清加入新的1.5ml离心管， 再加入15ul的磁珠悬浮液，震荡混
匀，放置5分钟，（如需高产量，可放置10分钟）期间混匀几次。
6. 把离心管放到磁力架上，静置30sec，磁珠自动被吸附在管壁，吸弃上清，磁珠
分离要在磁力架上完成。
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7. 加入500μl漂洗液WB（请先检查是否已加入无水乙醇!），颠倒混匀，放到磁力
架上，静置30秒，吸弃上清，磁珠分离要在磁力架上完成。
8.
9.
重复7一次。
吸净液体，室温放置1分钟，确保乙醇挥发干净，把离心管从磁力架上拿下来，
加50μl洗脱缓冲液EB（加热至65度，洗脱效率更高），轻轻吹打使磁珠完全悬
浮于洗脱后，室温静置5分钟。
10. 把离心管放到磁力架上，静置30sec，磁珠自动被吸附在管壁，将洗脱液转移到
洁净的离心管中，
-20℃保存备用。
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