基于secY基因对山东临沂枣疯病植原体的分子鉴定

山东农业科学２０１１，１０：４—７　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ　

基　ｓｅｃＹ基因对山东临沂枣疯病　

植原体的分子鉴定　

陈　妮，公娇芬，陈小飞，景茂峰，竺晓平　

（山东农业大学植物保护学院植物病理系，山东泰安２７１０１８）　

摘要：利用ＦＤ９ｆ／ｒ引物对采自山东临沂的枣疯病样品进行ｓｅｅＹ基因的ＰＣＲ扩增，并进行了序列测定，　

结果表明，该特异片段大小为１　４２１　ｂｐ。对获得的序列与ＮＣＢＩ数据库中相关植原体序列进行同源性分析、构　

建系统进化树和模拟ＲＦＬＰ分析，结果显示山东临沂枣疯病植原体属于ｓｅｃＹＶ—Ｃ亚组，与ｓｅｃＹＶ—Ｂ亚组的　

樱桃致死黄化株系（ＣＬＹ５）和ｓｅｃＹＶ—Ｎ亚组的桃树致死黄化印度分离株系（ＰＹ—ＩＮ）的亲缘关系最近，在亚　

组水平上进一步明确了山东临沂枣疯病植原体的分类地位。　

关键词：枣疯病；植原体；ｓｅｃＹ基因　

中图分类号：Ｓ４３６．６５　文献标识号：Ａ　文章编号：１００１—４９４２（２０１１）１０—０００４一ｏ４　

Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　Ｉｄｅｎｔｉｉｆｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ　Ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　Ｊｕｊｕｂｅ　

Ｗｉｔｃｈｅｓ’Ｂｒｏｏｍ　ｉｎ　Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　Ｂａｓｅｄ　ｏｎ　ｓｅｃ　Ｙ　Ｇｅｎｅ　

ＣＨＥＮ　Ｎｉ，ＧＯＮＧ　Ｊｉａｏ—ｆｅｎ，ＣＨＥＮ　Ｘｉａｏ—ｆｅｉ，ＪＩＮＧ　Ｍａｏ—ｆｅｎｇ，ＺＨＵ　Ｘｉａｏ—ｐｉｎｇ　

（Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆＰｌａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌｏｇｙ，Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｆｏＰｌａｎｔ　Ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ，Ｓｈａｎｄｏｎｇ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｔａｉａｎ　２７１０１８，Ｃｈｉｎａ）　

Ａｂｓｔｒａｃｔ　Ｔｈｅ　ｓｅｃＹ　ｇｅｎｅ　ｏｆ　ｊｕｊｕｂｅ　ｗｉｔｃｈｅｓ’ｂｒｏｏｍ　ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ（ＪＷＢ）ｃｏｌｌｅｃｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｌｉｎｙｉｎ　ｉｎ　Ｓｈａｎ—　

ｄｏｎｇ　Ｐｒｏｖｉｎｃｅ　ｗａｓ　ａｍｐｌｉｆｉｅｄ　ｕｓｉｎｇ　ＦＤ９ｆ／ｒ　ｐｒｉｍｅｒｓ　ａｎｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｄ．Ｔｈｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｆｒａｇｍｅｎｔ　ｗａｓ　１　４２１　ｂｐ．Ｔｈｅ　

ｓｅｑｕｅｎｃｅ　ｏｆ　ｊｕｊｕｂｅ　ｗｉｔｃｈｅｓ’ｂｒｏｏｍ　ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ　ｗａｓ　ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ｔｈｅ　ｒｅｌａｔｅｄ　ｓｅｑｕｅｎｃｅｓ　ｏｆ　ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ　ｉｎ　

ＮＣＢＩ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｏｆ　ｐｈｙｌｏｇｅｎｅｔｉｃ　ａｎａｌｙｓｉｓ　ａｎｄ　ｖｉｒｔｕａｌ　ＲＦＬＰ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　ｊｕｊｕｂｅ　ｗｉｔｃｈｅｓ’ｂｒｏｏｍ　ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ　

ｂｅｌｏｎｇｅｄ　ｔｏ　ｓｕｂｇｒｏｕｐ　ｓｅｃＹＶ—Ｃ，ｈａｖｉｎｇ　ｔｈｅ　ｃｌｏｓｅｓｔ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐ　ｗｉｔｈ　ＣＬＹ５（ｓｅｃＹＶ—Ｂ）ａｎｄ　ＰＹ—Ｉｎ（ｓｅｃＹ　

Ｖ—Ｎ）．　

Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ　Ｊｕｊｕｂｅ　ｗｉｔｃｈｅｓ’ｂｒｏｏｍ；Ｐｈｙｔ０ｐｌａｓｍａ；５ｅｃｙ　ｇｅｎｅ　

植原体是一种无细胞壁的原核生物，专性寄　国的各大枣区，严重阻碍了枣树产业的发展。我　

生于植物的筛管内，主要依靠叶蝉和飞虱等从韧　

国及韩国和日本科研工作者对枣疯病的分类和鉴　

皮部取食的半翅目昆虫传播，也可通过菟丝子和　

定做了大量的工作。朱水芳等报道了中国枣疯病　

嫁接传播，能够引起世界范围内２００多种重要的　

作为后选种新的亚组，属于１６ＳｒＶ—Ｂ亚组　；　

经济作物病害…，常常引起丛枝、黄化、簇生等症　

Ｊｕｎｇ等将枣疯病植原体作为一个独立的候选种　

状，造成巨大的经济损失。　

‘Ｃａｎｄｉｄａｔｕｓ　Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ　ｚｉｚｉｐｈｉ’　。到目前为　

枣树（Ｚｉｚｙｐｈｕｓ　ｊｕｊｕｂａ）是我国重要的干果和　

止，对枣疯病植原体的研究主要集中在１６Ｓ　ｒＲＮＡ　

特色经济树种之一，已有８　０００多年的栽培历史。　

基因上，王海妮等对陕西省枣疯病和酸枣丛枝病　

枣疯病（ｊｕｊｕｂｅ　ｗｉｔｃｈｅｓ’ｂｒｏｏｍ）是由植原体（ｐｈｙ－　

植原体１６Ｓ　ｒＲＮＡ和ｔ　基因的序列进行了同源　

ｔｏｐｌａｓｍａ）引起的一类病害，具有毁灭性，遍布于我　

性分析　；徐启聪等通过１６Ｓ　ｒＲＮＡ、１６Ｓ～２３Ｓ间　

收稿日期：２０１１－０４—１９　

基金项目：中国博士后科学基金（２００７０４１１１０３）；山东省博士后创新项目专项基金（２００７０２０１５）　

作者简介：陈妮（１９８６・），女，硕士研究生，主要从事植物病理学研究。Ｅ—ｍａｉｌ：ｃｈｅｎｎｉｃｈｎ＠１６３．ｃｏｍ　

十通讯作者，Ｅ—ｍａｉｌ：ｚｈｕｘｐ＠ｓｄａｕ．ｅｄｕ．ａｎ　

第１Ｏ期　陈妮等：基于ｓｅｃＹ基因对山东临沂枣疯病植原体的分子鉴定　５　

区序列（ＳＲ）及ｓｅｃＹ基因对中国各地不同枣树品　

的片段的重组克隆送北京博尚生物技术有限公司　

进行序列测定。将所得ＤＮＡ序列输人ＧｅｎＢａｎｋ　

进行Ｂｌａｓｔ检索，选择并下载相应序列，采用　

ＤＮＡＳＴＡＲ、ＤＮＡＭＡＮ和ＭＥＧＡ３．１软件进行序列　

分析，并构建系统进化树，采用ｐＤＲＡＷ３２软件进　

种上枣疯病植原体进行了ＰＣＲ检测及分子变异　

分析　引。本研究采用ＰＣＲ技术扩增了山东临沂　

枣疯病植原体的ｓｅｃＹ基因，试图在亚组水平上确　

定该种植原体的分类地位。　

１材料与方法　

行序列ＲＦＬＰ分析。　

１．１　材料　

２结果与分析　

枣疯病植株叶片采自山东省临沂市动植物　

２．１　ＰＣＲ扩增及序列分析结果　

园，病株表现明显丛枝症状，叶片变小，节间缩短；　

利用ＦＤ９ｆ／ｒ引物对，从枣疯病样品总ＤＮＡ　

克隆载体ｐＭＤ１８一Ｔ、ＰＣＲ产物回收试剂盒及其　

中扩增得到约１．４　ｋｂ的特异片段，与预期大小一　

它酶类等分子生物学试剂产品均购自ＴａＫａＲａ公　

致，而健康枣树植株和双蒸水对照均未出现特异　

司。　

条带。测序结果表明，该片段长１　４２１　ｂｐ（Ｇｅｎ—　

１．２植物总ＤＮＡ的提取及ＰＣＲ扩增　

Ｂａｎｋ登录号：ＧＵ５８５６７７），Ｇ＋Ｃ含量为２４．６％，　

参照刘小勇等　的ＳＤＳ—ＣＴＡＢ法提取发病　

包括部分核糖体蛋白基因叫ｌ５和大部分的ｓｅｃＹ　

枣树植株的总ＤＮＡ作为基因扩增的模板。植原　基因，其中ｓｅｃＹ基因长度为１　２１１　ｂｐ，共编码４０３　

体ｓｅｃＹ基因扩增采用Ｄａｉｒｅ等　¨设计的特异引物　

个氨基酸，将该植原体暂时命名为ＪｗＢ—ＬＹ。　

对ＦＤ９ｔＶｒ（５　一ＧＡＡＴＴＡＣＡＡＣ，ＩＩ（　［ｒＩ’Ｉ１ＧＡＡＧＡＣＧ一　

２．２系统进化及模拟ＲＦＬＰ分析　

３　，５　一１ｆＩＴＩ’ＧＣＴＴｒＣＡＴＡＴＣＴｒＧＴＡＴＣＧ一３　）。反　

将得到的基因序列与榆树黄化组植原体的　

应条件：９４℃预处理３　ｍｉｎ；９４℃４５　Ｓ，５２ｏＣ　３０　ｓｅｃＹ基因序列共同构建系统进化树（图１），结果　

ｓ，７２ｏＣ　９０　Ｓ，共３５个循环；最后于７２％延伸ｌ０　表明，山东临沂枣疯病植原体与ｓｅｃＹＶ—Ｃ亚组　

ｍｉｎ。反应体系为２５　ｌ，ＰＣＲ产物经０．８％琼脂　成员处于同一分支上，与ｓｅｃＹＶ—Ｂ亚组的樱桃　

糖凝胶电泳检测。　致死黄化株系（ＣＬＹ５）和ｓｅｃＹＶ—Ｎ亚组的桃树　

１．３序列测定及分析　

致死黄化印度分离株系（ＰＹ—ＩＮ）的亲缘关系最　

ＰＣＲ产物经纯化回收，与ｐＭＤ１８一Ｔ载体连　

近。　

接，转化大肠杆菌ＤＨ５ｃｔ感受态细胞，筛选含有目　

ｓｃｃＹＶ・Ｂ　Ｃ／￣５　ＡＹ１９７６９３　

ｓｅｃＹＶ－Ｎ　ＰＹ．ＩＮ　ＡＹ１９７６９４　

ｓｅｃＹＶ－Ｃ　ＪＷＢ　ＡＹ１９７６９５　

ＪＷＢ．Ｌ－Ｙ　ＧＵ５８５　７　

￥０７ｙＶ－Ａ　ＥＹ１　ＡＹ　１　９７６９０　

ｓｅｃＹＶ－Ｍ　ＥＹ６２６　ＡＹ　１　９７６９１　

￥Ｃｔ７ＹＶ－３　ＨＤ１　ＡＹ１９７６８７　

ｓ∞ＹＶ－Ｋ　ＡＬＹ８８２　ＡＹ１９７６９２　

ｓｃｃＹＶ・Ｉ　ＲＵＳ　ＡＹ　１　９７６９６　

ｓｅｃＹＶ—Ｌ　ＳｐａＷＢ２２９　ＡＹ１９７６８９　

ｓｅｃＹＶ－１３　ＦＤ－Ｃ　ＡＹ１　ｒ６８８　

￥ＯＣＹＶ－Ｆ　ＦＤ７０　Ａ￣１９７６８６　

ｓｅｃｙＶ—Ｈ　ＡＬＹ　ＡＹ１９　

ｓ∞ＹＶ－Ｅ　ＦＤｏ　ＡＹ１９７６８５　

注：分支上的数据表示在１００次重复抽样中该分支获得５０％以上的自展支持率；　

分支后为亚组地位，种类及ＧｅｎＢａｎｋ登录号。　

图１基于ｓｅｃＹ基因序列分析的系统发育树　

第１Ｏ期　陈　妮等：基于ｓｅｃＹ基因对山东临沂枣疯病植原体的分子鉴定　７　

亚组　］。本研究根据Ｌｅｅ所建立的分类体系，通　ｗｉｔｈ　ｊ￣ｕｂｅ　ｗｉｔｃｈｅｓ’＿ｂｒｏｏｍ　ｄｉｓｅａｓｅ［Ｊ］・Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ　Ｊｏｕｒ－　

过系统进化树分析及模拟ＲＦＬＰ分析，确定山东　

省临沂枣疯病植原体样品属于ｓｅｃＹＶ—Ｃ亚组，　

与ｓｅｃＹＶ—Ｂ亚组的樱桃致死黄化株系（ＣＬＹ５）　

和ｓｅｃＹＶ—Ｎ亚组的桃树致死黄化印度分离株系　

？：　ｏｆ。ｙ吼　

，

ｍｉ。　ｒｙ　Ｍｊ　ｂｉ　ｏｇｙ，　。ｏ３，　：ｍ　’一　

［４　３王海妮

吴云峰，安凤秋，等．枣疯病和酸枣丛枝病植原体　

１６５　ｒＤＮＡ和ｔ　基因的序列同源性分析［Ｊ］．中国农业科　

学，２００７，４０（１０）：２２００—２２０５・　

２００９

４９（１１）：１５１０—１５１９．　

．

确定了山东临沂枣疯病植原体的分类地位（ＰＹ－１Ｎ）的亲缘关系最近，　亚　平去进＝　

同时　

。

也证明了枣疯病植原体ｓｅｃＹ基因可以作为植原　

体分类系统的辅助工具，是对１６Ｓ　ｒＲＮＡ基因和　

［６　３刘小勇，田素忠，秦国夫，等．提取植物和微生物ＤＮＡ的　

Ｄ　一ｃＴＡＢ改进法［Ｊ］．北京林业大学学报，１９９７，１９　

核糖体蛋白基因进行分类方法的一个补充，也是　［７］　ｃｌ　

，

Ｒ。ｉｎｅｒ１　ｗ，　ｔａ１．ＤｅＩ。　ｔｉ０ｎ　ｄ　ｄｉ　ｎＩｉａ一　

一

种可靠、简便的方法ｏ　ｔｉ０ｎ　ｏｆ肿ｐｅｖｉｎｅ　ｙｅｌｌｏｗ８　ｐｈｙｔｏｐｌａ８ｍａｓ　ｂｅｌ０ｎｇｉｎｇ　ｔｏ　ｅ１ｍ　ｙｅｌｌｏｗｓ　

ｇｒｏｕｐ　ａｎｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｓｔｏｌｂｕｒ　ｓｕｂｇｒｏｕｐ　ｂｙ　ＰＣＲ　ａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎ　ｏｆ　

参考文献：　ｎ。ｎ—ｒｉｂｏｓｏｍａｌ　ＤＮＡ［Ｊ］

．

Ｅｕｍｐｅａｎ　Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆＰＩａｎｔ　Ｐａｔｈｏｌ。．　

［　］　Ｂａｉ　ｘ，ｚｈａ¨ｇ　Ｊ，　“ｇＡ，ｅｔ　ａ１．　ｎｇｗｉｔｈ　ｇｅｎ０ｍｅ。ｎｓｔａｂｎｉ。　［８］　

ｅ　ｌ　Ｍ，ＤａｖｉｓＲ　Ｅ，Ｇｕｎｄｅ　Ｄ　Ｅ．Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍ８８：ｐｈｙｋ卜　

ｔｙ：　ｈ　ａｄ　Ｐｔａｔｌ。“０ｔ　ｐｈｙｔ叩ｈ　：ｔ０　ｍ　ｅｒｓｅ。ｎｖ１ｍｎｍｅ“ｔｓ　ｏｔ　ｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ　ｍｏｌ１ｉｃｕｔｅｓ［Ｊ］．　Ａｎｎｕｌａ　Ｒｅｖｉｅｗ　ｏｆ　Ｍｉｃｒｏｂｉｏｌｏｇｙ，　

ｔｈｅｉｒ　“　ａｎｄ　ＰＩ　“ｔ　ｈ。。ｔ　【Ｊ　Ｊ・ｊ。“　ｌ　ｏｆ　Ｂ　。ｔｅｔｉｏｌｏｇｙ，　２０００

．

５４．２２１—２５５．　

２ｏｏ６，ｌ８８（ｉ０）：３６８２—３６９６’　［９］Ｌ

，

ｅｅ　Ｉ　Ｍ，Ｍａｒｔｉｎｉ　Ｍ，Ｍａｒｃ０ｎｅ　Ｃ，ｅｔ　１ａ．Ｃ１ａ８ｓｉｉｆｃａｔｉ０ｎ　ｏｆｐｈ　。．　

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．　

ｕ　ｍ　ｒｅｐｒｅ　ｎｔ　ｎ　ｗ　ｎ栅ｄⅡ　ｓｕｂｓｐｅｃ　ｅｓ　。　ａｘｏｎＬ　

Ｍ　，１９９６，４：２１８．　

ｓ０ｃｉａｔｅｄ　ｗｉｔｈ　ｅｌｍ　ｙｅｌｌｏｗｓ『Ｊ］．　Ｉｎｔｅｍａｔｉ０ｎａｌ　Ｊｏｕｎ１ａ１　ｏｆ　Ｓｙｓｔｅｍ．　

，　

ａｔｉｅ　ａｎｄ　Ｅｖ０１ｌｌＩｉ。ｎ　Ｍ　ｉ。ｇｙ，２ｏｏ４，５４：３３７—３４７．　

Ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ　ｚｉｚｉｐｈｉ’，ａ　ｎｏｖｅｌ　ｐｈｙｔｏｐｌａｓｍａ　ｔａｘｏｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　

（上接第３页）键¨。。。这与本试验结论一致，可见　［３］石涛，王洪刚，何方，等．小麦矮秆新基因的ＳＳＲ标记　

获得堡曼　曼　本试验获得的最佳体系与前人在大白菜¨全毛　孚苎。　ｍ　　

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番茄　引、黄花苜蓿　、苹果　】、大豆［＂　等作物上　／ｅｎｔａ　Ｃｒａｎｔ　…．Ｍｏ１．Ｅｃｏ１．Ｒ。。　ｒ＿＇２００８，８（３）：６８２一　

得到最佳优化体系在各反应因子最佳浓度上有明　６８５・　

显差异，可见物种不同最佳ＳＳＲ反应体系不同，　［　］ｃｈｅｎ　Ｃｘ，　？“　Ｔ　’Ｍ　。　？，ｄ　０７　，　ｑｕ　：　

建立一套适合本物种的ＳＳＲ最佳反应体系很有　ｉ。ｉ　ｉ　‘ｄｌ　。　．Ｐｌａｎｔ　ｓ　ｉ．，２ｏｏ８，ｌ７　：ｌ一８．　

必要。本试验利用Ｌ　６（４　）正交试验，获得了适合　［６］艾呈样，刘庆忠，李国田，等．甜樱桃品种ＳＳＲ指纹图谱的　

萝卜的ＥＳＴ—ＳＳＲ最佳反应体系：３．０　ｍｍｏｌ／Ｌ　构建［Ｊ］・山东农业科学，２０１０，４：８一１０・　

Ｍｇ¨

，

０．５００　ｍｏｌ／Ｌ引物，０．１０　ｍｍｏｌ／Ｌ　ｄＮＴＰ，　釜　伟主编中国　北　科学技术文献　

Ｉ．０　Ｕ　Ｔａｑ酶，５０　ｎｇ模板，总体积２０　ｌ。体系验　［８］李丽

，

何伟明，马连平，等．用ＥＳＴ—ＳＳＲ分子标记技术　

证结果理想，可用于不同的萝卜材料和ＳＳＲ一　构建大白菜杨　种质及其指纹图谱库…．基因组学与应　

ＰＣＲ的反应试验。　用生物学，２００９，２８（１）：７６—８８・　

［９］　王欢欢，姜晶，王慧，等．正交设计优化番茄基因组　

参考文献：　

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４８—５Ｏ．　

Ｈａｎ　Ｚ，Ｗａｎｇ　Ｃ．Ｓｏｎｇ　Ｘ，ｅｔ　ａ１．Ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ，ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ　

［１Ｏ］佟海申，宋琳，张志刚，等．大白菜ＥＳＴ—ＳＳＲ反应体系　

ａｎｄ　ｍａｐｐｉｎｇ　ｏｆ　Ｇｏｓｓｙｐｉｕｍ　ｈｉｒｓｕｔｕｍ　ｄｅｒｉｖｅｄ　ＥＳＴ・－ＳＳＲｓ　ｉｎ　ａｌ—　

优化及引物筛选［Ｊ］．科技导报，２０１０，２８（３）：７６—８１．　

ｌｏｔｅｔｒａｐｌｏｉｄ　ｃｏｔｔｏｎ［Ｊ］．Ｔｈｅｏｒ．Ａｐｐ１．Ｇｅｎｅｔ．，２００６，１１２（３）：　

［１１］吴宗怀，王俊杰，云锦凤，等．黄花苜蓿ＳＳＲ—ＰＣＲ反应体系　

４３０—４３９．　

的优化［Ｊ］．内蒙古农业大学学报，２０１０，３１（２）：１２４—１２８．　

［２］　

Ｚｈａｎｇ　Ｋ　Ｐ，Ｔｉａｎ　Ｊ　Ｃ，Ｚｈａｏ　Ｌ，ｅｔ　ａ１．Ｍａｐｐｉｎｇ　ＱＴＬｓ　ｗｉｔｈ　ｅｐｉ—　

［１２］王娟．苹果ＥＳＴ—ＳＳＲ引物的开发及部分品种亲缘关系　

ｓｔａｔｉｃ　ｅｆｆｅｃｔｓ　ａｎｄ　ＱＴＬ×ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｉｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｏｒ　Ｄｌａｌ１ｔ　

分析［Ｄ］．郑州：河南农业大学，２００９．２２—２４．　

ｈｅｉｇｈｔ　ｕｓｉｎｇ　ａ　ｄｏｕｂｌｅｄ　ｈａｐｌｏｉｄ　ｐｏｐｕｌａｔｉｏｎ　ｉｎ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ｗｈｅａｔ　

［１３］闰伟，姚丹，张洋，等．大豆ＳＳＲ—ＰＣＲ反应体系优化　

［Ｊ］．Ｊ．Ｇｅｎｅｔ．Ｇｅｎｏｍｉｃｓ，２００８，３５：１１９—１２７．　

［Ｊ］．河北农业科学，２０１０．８：３６—３９．